荧光衍生-高效液相色谱分离及质谱鉴定芳香胺[1].doc

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1、・•■■•■••■••■一,••.•■■■■•ao•••■••■■•—••荧光衍生■髙效版相色i晋分离及质谱鉴定芳香胺户宝军I”，孙志伟彳，高平孑，尤进茂和，2（1.曲阜师范大学生命有机分析重点实验室，曲阜273165;2.中国科学院西北高原生物研究所,西宁810001;3.淄博市临淄区环保分局，淄博255400）摘要厂含氮杂环光致发光分子经柱-前衍住化，茱用荧光检测-及柱后•在线质谱鉴定对废水中胺类化合物进行了测定c衍生物荧光激发和发射波长分别为A„=275nm,Ami=380nmo在pH8.0的

2、硼酸钠缓冲液中，于40戏下衍生反应40min后获得稳定的荧光产物。在HypersilBDS即柱上，采用梯度洗脱对5种芳香胺衍生物进行了优化分离。釆用大气压化学电离源（APCISouwe）正离子模式进行在线的柱后质谱定性，实现了5种芳香胺衍生物的快速、准确测定。方法具有良好的重现性，线性回归系数大于0.9998,检出限在71~81fmol水平。''关键词：高效液相色谱■质谱；荧光检测；柱前衍生；芳香胺中图分类号：0657.63文献标识码：A文章编号：1000£720（2009）02・034心苯胺和荼胺

3、类化合物作为合成中间体在染料、杀虫剂、橡胶、粘合剂、塑料和制药工业中被广泛伸田妆举仙合物样帝适汾丫帝性十对A筮且右潜在的致癌和突变作用，也是造成环境污染重要来源⑴。该类化合物的测定方法通常有气相色谱法°和高效液相色谱法S5】，应用高效液相色谱对芳香胺化合物进行分离时，由于他们本身的弱碱性，在反相色谱柱上易造成色谱峰的拖尾，严重干扰定量测定。为解决这一问题，通常采用柱前衍生化使其•■•••■■.•■■■•••••«••••••■・•■•••■■■■•■••■••.•■■•••••■转变为相应的酰胺类衍

4、生物进行分离和测定67】。本文采用合成的2-（llH-苯［a］咔哩）异丙基氯甲酸酯（BCPC-C1）作柱前衍生化试剂，衍生后展现出较强的荧光发光性质，与不衍生的紫外检测相比明显提高了检测的灵敏度。标记反应在pH8.0的硼酸钠缓冲液中进行，所得衍牛产物稳定、产率高。标记溶液经乙酸中和后，不必进行预处理可直接进样分析。借助于在线的柱后质谱定性，实现了污水中多种芳香胺类化合物的快速、准确测定。1实验部分1.1仪器与试剂AgilentllOO型高效液相色谱-质谱联用仪（Agilent公司）配备四元梯度泵，在

5、线真空脱气机,荧光检测器，100位自动进样器，大气压化学电离源(APC!Source);Hype曲！BBS氐色谱柱(4.6i.d.x200mm,5/zm;大连依立特公司）。苯［a］咔瞠）异丙基氯甲酸酯（BCPCC1,由本实验室合成）；苯胺、邻甲苯胺、对甲苯胺、邻甲氧基苯胺和对漠苯胺标准样品购自Sigma公司；乙腊光谱纯（Merck公司）；冰乙酸，硼砂等均为分析纯厂纯水由超纯水系统制备1.2标准溶液的配制准确取定量芳香胺标准品，用乙月背配成1.0xIO'2mol/L的溶液，相应低浓度芳香胺标准液（2.

6、0xIO"mol/L）用乙睛稀释而成。称取16.9mg的BCPC-C1用乙睛定容至10mL,浓度为5.0x10"3moi/ko1.3芳香胺的衍生向2mL安培瓶中依次加入150“pH8.0的硼酸钠缓冲液，100//L乙睛，30“L芳香胺标准样品，45“BCPC-C1衍生试剂，封口后于40%水浴中反应40min,取出加入20ML体积分数50%乙收稿日期：2007-11-26;修订日期：2008-03-05基金项目：国家自然科学基金（20075016）项目资助作者简介：户宝军（1982-）,男，硕I:研究

7、生；E-mail：hbj19820218@163.com、jinyou6304@163.com酸，直接进样10MLo衍生反应过程见图lo硼酸钠缓冲液(pH8.0)图1BCPC-C1与芳香胺衍生反应1.4色谱及质谱条件色谱柱：HypersilBDSC%色谱柱(4.6mmi.d.x200nun,5ptm)o流动相A：纯水；B：纯乙月青。洗脱程序：0min,38%A;16min,38%A;20min,25%A;25min,0%A;35min,0%Ao流速为1.0niVmin,进样量10ML,柱温30弋。荧

8、光激发和发射波长分别为：=275nm,AtTO=380nm0质谱条件：大气压化学电离源(APCISource),正离子模式，喷雾压力0.41MPa,干燥气流量为5I7min,干燥气温度350弋，气化温度450龙，毛细管电压3500V,电晕电流4000nA(Pos)⑻。2结果与讨论2.1标准品的色谱分离及质谱鉴定在HypersilBDSC】8色谱柱上，用乙睛/水作流动相，采用梯度洗脱在35min内实现5种芳香胺衍生物的完全基线分离，结果见图2O采用大气压化学电离源(AP