高产L-异亮氨酸谷氨酸棒杆菌的菌种选育及代谢优化.pdf

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4、读珠；；蠢沾杏：：过进括，心篇诚帝游Ｖ＞ｆ；密：巧磯Ｖ，應．心織分类号：Q786单位代码：10152密级：公开学号：13107100002030大连工业大学硕士学位论文中文题目：高产L-异亮氨酸谷氨酸棒杆菌的菌种选育及代谢优化英文题目：ScreeningandmetabolicoptimizationofCorynebacteriumglutamicumforL-isoleucineproduction学科名称：生物学隶属学院：生物工程学院研究生：李忠财指导教师：丛丽娜教授指导教师：张大伟研究员2016年6月学位论文独创性

5、声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果，本论文不含其他。除文中己经注明引用的內容外个人或其他机构己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究作出重要贡。献的个人和集体，均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意学生签名：本１财关于硕±学位论文使用授权的说明论文题目：高产以异亮氨酸谷氨酸棒杆菌的菌种选育及代谢优化本学位论文作者完全了解大连工业大学有关保留、使用学位论文的规定，大连工业大学有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅

6、和借阅，可＾＾＾将学位论文的全部或部分内容编入有、、关数据库进行检索，可１＾＾采用影印缩印或扫描等复制手段保存茫编学一致位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。。是否保密（否），保密期至年月日为止、财导师签名：学生签名：先忠２０１６年６月４日摘要摘要CorynebacteriumglutamicumLD320是一株L-异亮氨酸高产菌株。该菌通过多轮传统诱变筛选获得，很难再进一步通过诱变提高其L-异亮氨酸产量。本文针对L-异亮氨酸生产菌Coryneba

7、cteriumglutamicumLD320，结合代谢组学、蛋白组学等技术对L-异亮氨酸合成途径、分泌系统及其调节机制进行了研究，并进一步提高了C.glutamicumLD320的L-异亮氨酸的产量。主要结论如下：（1）通过在C.glutamicumLD320中过表达L-异亮氨酸合成途径中野生型和突变型的关键酶比较发现，表达突变型酶的产酸水平优于表达野生型酶，其中突变型的TD1和AHAS1能够显著提高谷氨酸棒杆菌中L-异亮氨酸的产量。（2）对TD和AHAS酶学性质研究发现，突变型TD1能够完全耐受高浓度的L-异亮氨酸的反馈抑制，

8、还能被低浓度的L-异亮氨酸激活；突变型AHAS1能部分耐受单个或组合支链氨基酸的反馈抑制。同时，突变型TD1和AHAS1的共表达菌株LD320/pXMJ19-ilvBN1-ilvA1的L-异亮氨酸摇瓶产量达到4.55g/L，产量较出发菌株提高了29%。（3）在C