【实验】DNA片段的扩增和琼脂糖凝胶电泳检测.ppt

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1、5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段课程标准尝试PCR技术的基本操作和应用。课标解读1.理解PCR技术的基本原理。2.知道PCR技术的基本操作过程。3.讨论PCR技术的应用。打开DNA双链提供DNA复制的模板合成子链的原料催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸细胞内DNA复制条件DNA复制方向DNA热变性PCR反应过程PCR反应过程PCR实验操作1．实验用具(1)PCR仪：该仪器能自动调控，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个代替，操作时按程序来回转移PCR反应的微量离心管。(2)微量离心管：总容积为，实际上是进行的场所。(3)微量移液器：用于。温度

2、恒温水浴锅0.5mL多聚酶链式反应转移PCR配方中的液体(将微量离心管放在离心机上，离心约10s。目的是使反应液集中在离心管底部)3.DNA含量的测定①稀释（50倍）②对照调零（蒸馏水作对照）③测定（取DNA稀释液100uL）④计算DNA含量（g）＝50x(260nm的读数）x稀释倍数50：OD260=1相当于50g/ml双链DNA①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_________________________、______________、___________、______________

3、_________②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列（前提）四种脱氧核苷酸一对引物耐热的DNA聚合酶（Taq酶）指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增PCR总结PCR技术扩增与DNA复制的比较DNA双链复制四种脱氧核苷酸模板、能量、酶、引物高温下变性解旋解旋酶体外细胞核内热稳定的DNA聚合酶细胞内的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整个DNA分子1.PCR技术是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，有关叙述不正确的是()A．PCR技术是在实验室中以少量D

4、NA制备大量DNA的技术B．反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板C．PCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增D．应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变C2.(2011江苏)请回答有关问题。1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________。②在第______轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。15/16三2）设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合

5、理(如下图)，请分别说明理由。①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为________________________________________________________________________。DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上