【实验】DNA片段的扩增和琼脂糖凝胶电泳检测.ppt

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1、拯救“东方宝石”家族———PCR技术的应用大兴一中张美燕CITES濒危等级：濒危(E)IUCN濒危等级：CITES附录I国家保护等级：一级中国濒危动物红皮书濒危等级：濒危濒危物种救救我们吧！安能辨我是雌雄？一、朱鹮鸟的性别鉴定猜猜我是“男”还是“女”？资料1：朱鹮为雄雌同形同色的鸟类，成鸟全身羽色以白色为基调，但上下体的羽干以及飞羽略沾淡淡的粉红色。鸣声特征判定法问题1：你选用哪种方法对其进行性别鉴定？生殖器判定法染色体类型判定法×××ZW型ZZ型代表W染色体上特定的基因序列什么是PCR技术？PCR技术的原理是什么？资料2：

2、鸟类的性染色体上存在着一条假基因序列EE0.6，该基因属于基因家族在进化过程中形成的无功能的残留物，W染色体上的EE0.6基因序列存在着特异性。实验设计请你帮助研究者设计一个实验对朱鹮鸟进行性别鉴定：实验目的：选择合适的样本：确定自变量、因变量：羽毛的羽髓部鉴定仅存的7只朱鹮鸟性别血液、羽毛、脚垫、肌肉自变量：7只朱鹮鸟的DNA模板因变量：电泳结果条带的有无实验步骤1.选取7只离心管，编号1-7号；2.将7只朱鹮鸟的羽髓样本细胞分别置于1-7号离心管中，分别提取DNA，并对DNA提取结果进行检测；3.将7只朱鹮鸟的样本DNA

3、作为模板置于PCR扩增仪中，分别扩增DNA片段；4.将7只离心管的PCR扩增结果分别进行电泳；5.记录实验结果。DNA提取结果的检测1234567M问题2：Marker的作用是什么？问题3：提取到的DNA继续可以用于接下来的实验吗？什么原因可能会导致该结果的出现？NDNA提取结果的检测PCR——设计引物引物I（EE0.6F）：5'-CACCCTGGATTGGACAACCTATTTC-3'引物II（EE0.6R）：5'-CACTCTTTCCAGGAAATCAA-3'PCR——选择合适的酶解旋酶DNA连接酶DNA聚合酶TaqDN

4、A聚合酶TaqDNA聚合酶PCR——反应体系成分体积/μLMaker0.3共计10xBuffer（缓冲体系）dNTPs2种引物TaqDNA聚合酶DNA模板无菌水15.110.30.31220TaqDNA聚合酶DNA模板PCR——扩增过程PCR循环过程高温变性：90-95℃，30s低温复性：50-55℃，30s引物延伸：72℃，60s1234567M结果检测——电泳实验结果300bp想一想问题4：本实验的自变量、因变量分别是什么？问题5：为什么2号5号有条带，而其他组没有条带？问题6：1、3、4、6、7号一定是雄性吗？问题7：

5、还有哪些因素可能导致1、3、4、6、7组不出现条带？1234567M300bpN实验组别1-7分别代表1-7号个体样本扩增基因经电泳后形成的条带，N为空白对照组，M代表Maker的基因电泳条带。ZW型ZZ型代表CHD基因资料3：鸟类的CHD基因（编码染色体螺旋DNA结合蛋白）在Ｚ、W染色体上存在着序列长度的差异，Z染色体上该基因序列较长，而W染色体上该基因序列较短。552bp358bp问题8：你能判断出1-7号个体的性别分别是什么吗？想一想12345M6N7实验组别1-7分别代表1-7号个体样本扩增基因经电泳后形成的条带，N

6、为空白对照组，M代表Maker的基因电泳条带。资料4：朱鹮鸟幼雏在自然环境中成活率低下，甚至出现胚胎致死的现象。研究者发现朱鹮鸟易的近亲繁殖现象是导致朱鹮繁殖成功率低下的重要原因。请你救救我的孩子！二、朱鹮鸟的亲子鉴定资料5：微卫星DNA是一段2-6个核苷酸为单元的重复序列，如···GTGTGTGT….···，可用(GT)n代表，n代表重复出现的次数。每对同源染色体上的重复次数虽然不同，但是每个个体之间存在着显著的差异性。同源染色体上的两个重复次数越接近，则两人的亲缘关系就更近。因此，可采用以下T17、T13、D19、D01

7、、D16、D17、D327个位点判断鸟类的亲缘关系。结果分析T17T13D19D01D16D17D32个体1，雄220/240205/234197/22180/84100/110124/132166/174个体2，雌220/240205/217197/22180/90100/110124/132166/174个体3，雄148/148190/217193/22175/8490/100124/132148/156个体4，雌244/244217/234197/22175/90100/104132/148144/156个体5，雌22

8、0/244205/217197/22175/90100/110132/148160/166个体6，雄244/224205/217197/22175/90100/110132/148148/160个体7，雄244/244217/234197/22175/90104/116132/148144