卵细胞质内单精子注射治疗不孕症34例临床总结.doc

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1、卵细胞质内单精子注射治疗不孕症34例临床总结第一军医大学学报1999年第19卷第4期邢福祺陈士岭闫宗合陈东红孔令红宋兰林陈思梅摘要目的：总结应用单精子卵细胞质内注射(ICSI)治疗不孕症的临床效果。方法：对34对男性因素、原因不明、受精障碍不孕患者采用GnRHa长周期促排卵方案，给有第一极体的卵细胞行单精子注射。结果：34例34个治疗周期中，1例因反应不良取消。取卵数378个，注射卵数317(83.9%)个，正常受精卵231个(72.9%),卵裂228(98.3%)个,良好胚胎99(43.4%)个，平均移植胚胎数3.6个，临床妊娠12例(移植周期妊娠率为3

2、6.4%)o结论：ICSI是治疗男性因素、原因不明、受精障碍等因素引起不孕症的一种切实可行的方法。关键词：单精子卵细胞质内注射不孕症1992年Palermo[1]在世界上率先报道应用卵细胞质内单精子注射(Intracytoplasmicsperminjection,ICSI)技术获得健康新生儿出生。这一技术为不孕症治疗，特别是男性原因不孕及受精障碍的治疗带來福音，可谓是体外受精胚胎移植技术的一个重大突破性成果。因而这一技术很快在世界范围普及开来。我院自1998年9月开始运用这一技术治疗不孕症34例，获临床妊娠12例，3例已分娩健康新生儿。1资料与方法1.1

3、患者情况1998年9月至1999年5月在南方医院生殖中心接受治疗的34对不育患者，女方平均年龄(31.0±4.2)岁,男方年龄(30.9±3.5)岁，平均不育时间(5.1±2.8)年。不孕原因：男方少、弱精症25(73.5%)例，原因不明不孕3(8.8%)例，受精障碍6(17.6%)例(指前次IVF时不受精或受精率少于30%)0男方患者染色体检查未见异常。1.2方法1.2.1超促排卵均采用长周期GnRHahPFSH方案。2个主卵泡直径达16〜18mm时肌注HCG10000U后34〜36h经阴道B超引导下取卵。1.2.2卵细胞处理实体镜下确认卵丘复合体后，立

4、即收入含0.35%PPF(Plasmaproteinfraction,Plasmamate,USA)的HEPES-bufferedhTF(IrvineSci,USA)简单盐平衡液中，经含0.35%pPF的HTF简单盐平衡液洗一次，37°C、5%C02条件下培养于含0.35%pPF的HTF中3~6ho卵丘复合体用含80000u/L透明质酸酶(Sigma,USA)的HEPES-bufferedhTF适当消化处理，口制的毛玻璃管吹吸法完全去除颗粒细胞，获得显微注射用裸卵。1.2.3精子处理普通光镜下查精液常规，据精液常规参数用Percoll不连续密度梯度或微量P

5、ercoll不连续密度梯度分离精子，含0.35%PPF的HEPES-bufferedhTF和含0.35%PPF的HTF各洗涤一次，用0.35%PPF的HTF稀释成适当浓度。1.2.4显微操作固定针、注射针购自Cook公司。显微操作在NikontE300配Hoffman调制反差光学系统、NarishigenT-88NE显微操纵仪、NikonDIAPHOT300恒温罩（37°C）设备上完成。选择已释放第一极体的第二次减数分裂中期成熟卵细胞（MII）进行注射。注射时胞浆回吸至卵细胞膜破裂（见注射针内回吸胞浆突然较快速度流动）。注射后的卵细胞用微滴法（20含0.3

6、5%PPF的HTF/滴，1个卵细胞/滴）培养。1.2.5精子制动选择止常形态精子，用注射针将精子尾部做波浪运动按压并损伤精子尾部，以便确实破坏鞘膜，释放可能的卵细胞激活信号。1.2.6受精判断注射后16〜20h在倒置显微镜上检查受精情况。有明显雌、雄原核和第一、第二极体者判断为正常受精1.2.7胚胎评分注射后40〜44h检查胚胎形态。以卵裂速度，即卵裂球数为最重要评分依据，4细胞或以上细胞数（24个卵裂球）满分为4分，3细胞满分为3分，2细胞满分为2分，要求卵裂球人小均匀，没有无核碎片；无核碎片W5%,扣0.5分，无核碎片W10%,扣1分，无核碎片＞10%

7、,扣分数逐步增加；卵裂球大小不均匀扣1分，3细胞中两小一大（较大者可能将分裂为两较小细胞）不算卵裂球大小不均。1.2.8移植胚胎选择与移植方法尽量选择分数较高的胚胎进行移植，相同分数下，卵裂球较多的胚胎优先移植。移植胚胎数据病人情况、胚胎形态而定W4个。移植管为Cook公司产品。1.2.9黃体支持与黃体补充疗法根据患者情况采用注射hCG或黄体酮维持黄体功能。于移植后14〜16d查血清B-HCG,4周后B超检查胎囊、胎心，确定妊娠与否。2结果与讨论已获临床妊娠的12例中，流产2例，现已分娩3例。ICSI已成为治疗不孕症的一种重要手段，其最初的适应症为男方精子

8、数过少或运动能力过差的男性不孕症。近年其适应症有扩大趋势，我们除了