骨髓间充质干细胞复合Bio-oss修复兔颅骨缺损的实验研究.pdf

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1、1西南医科大学硕士学位论文目录中文摘要..............................................-3-英文摘要..............................................-8-前言................................................-14-实验一兔BMSCs的体外分离培养及诱导成骨分化和材料与细胞复合的研究......................................................-16-材料与方法.......................

2、....................-16-结果.............................................-20-讨论.............................................-23-结论.............................................-27-实验二兔BMSCs复合Bio-oss修复兔颅骨缺损..............-28-材料与方法...........................................-28-结果.....................

3、........................-35-讨论.............................................-44-结论.............................................-51-参考文献.............................................-52-英汉缩略词对照表........................................-59-致谢................................................-61-综述....

4、............................................-63-‐ 2 ‐ 西南医科大学硕士学位论文骨髓间充质干细胞复合Bio-oss修复兔颅骨缺损的实验研究中文摘要目的：基于兔颅骨缺损动物模型，采用骨髓间充质干细胞（bonemesenchymalstemcells，BMSCs）为种子细胞，Bio-oss为支架材料，复合培养植入兔颅骨缺损，对比观察复合物组，Bio-oss组，BMSCs组，空白组成骨效果。观察组织工程骨修复兔颅骨缺损的过程、效果，为骨组织工程（Bonetissueengineering，BTE）的临床应用提供参考。方法：分离培养雄性日本

5、大耳兔BMSCs，将其作种子细胞，在雌性日本大耳兔颅骨采用一致的外直径6mm的环形骨钻制造全层骨缺损3个。共计32只雌性日本大耳兔，每组8只。将兔随机分A、B、C、D四组，植入不同材料，A组：复合物组（植入Bio-oss复合BMSCs），B组：单纯Bio-oss组（植入Bio-oss），C组：单纯BMSCs组（植入BMSCs），D组：空白组。ABCD组表面均覆盖引导组织再生（Guidedtissueregeneration，GTR）膜。分别于2、4、8、12周四个时间节点处死，每组每个时间节点处死2只。标本检测：大体观察，X线检测，组织学及组织形态分析，A组及C组行聚合酶链式反应（p

6、olymerasechainreaction，PCR）检测。结果：1.通过抽取雄性兔骨髓（bonemesenchymal，BM），经密度梯度离心法结合贴壁筛选法可获得BMSCs，流式细胞术（flowcytometry，FCM）检测BMSCs高表达CD44：96.8%，低表达CD45：0.8%。BMSCs经成骨诱导后向成骨细胞分化，细胞形态转变，体积逐渐增大，出现肥大梭形细胞及不规则多角形细胞，多角形细胞逐渐增多，未见明显接触抑制。细胞‐ 3 ‐ 西南医科大学硕士学位论文诱导三周后，甲苯胺蓝染色见实验组细胞出现蓝黑色颗粒，有深蓝色钙化结节影，呈强阳性，对照组弱阳性。茜素红染色，实验组见

7、明显红色钙结节，对照组未见钙结节。2.实验动物一般情况：动物无死亡，无活动异常，切口处未见明显红肿、炎症、感染。3.大体观察见：AB组2、4、8、12周均可见Bio-oss颗粒，2、4、8周时较明显，12周时仍可见Bio-oss颗粒，但较前三个时间点更少，2周及4周时质中，周界清，缺损充填处表面粗糙颗粒状。8周时，质较硬，周界较模糊（欠清晰），表面较光滑，12周时，质硬，周界模糊，表面较光滑。CD组可见新生组织向心性生长，2周及4周均见新生组织质软，周界较