利用环介导等温扩增技术快速检测饮用水中的大肠杆菌.pdf

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1、山东农业科学2017，49(1):130～135ShandongAgriculturalSciencesDOI:10．14083/j．issn．1001－4942．2017．1．028利用环介导等温扩增技术快速检测饮用水中的大肠杆菌12232422谷晓红，谭晴晴，刘艳艳，王文博，范阳阳，朱天翼，张全芳，步迅(1．山东省农作物种质资源中心，山东济南250100;2．山东省农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室，山东济南250100;3．山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/

2、山东省食品质量与安全检测技术重点实验室，山东济南250100;4．韦兰学院，美国威斯康星州53916)摘要:本研究以饮用水为研究对象，利用大肠杆菌malB保守基因设计LAMP特异引物，通过优化反应条件，建立了适用于快速检测饮用水中大肠杆菌的LAMP方法，可在60℃条件下反应60min完成检测，检测灵敏度达到1．35CFU/mL。利用SYBＲGreenⅠ染料剂可在紫外灯下直接观察检测结果。通过检测掺入已知大肠杆菌的纯净水样品，结果表明，本研究所建立的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便的特点，可用

3、于饮用水中大肠杆菌致病菌的快速检测，对预防和控制大肠杆菌的传染具有重要意义。关键词:饮用水;环介导恒温扩增;大肠杆菌;快速检测中图分类号:X832文献标识号:A文章编号:1001－4942(2017)01－0130－06ＲapidDetectionofEscherichiacoliinPurifiedWaterbyLoop－MediatedIsothermalAmplificationTechnology1223GuXiaohong，TanQingqing，LiuYanyan，WangWenbo，342

4、2FanYangyang，ZhuTianyi，ZhangQuanfang，BuXun(1．ShandongCenterofCropGermplasmＲesources，Jinan250100，China;2．Bio－TechＲesearchCenter/KeyLaboratoryofLifeScienceApplication，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250100，China;3．InstituteofAgriculturalQualityS

5、tandardandTestingTechnology，ShandongAcademyofAgriculturalSciences/ShandongProvincialKeyLaboratoryofFoodQualityandSafetyTestingTechnology，Jinan250100，China;4．WaylandAcademy，Wisconsin53916，USA)AbstractInthisstudy，withthespecificprimersdesignedaccordingtoth

6、econservedregionofmalBgeneofEscherichiacoli，arapidmethodofloop－mediatedisothermalamplificationfordetectingEscherichiacoliinpurifiedwaterwasestablishedthroughoptimizingthereactionconditions．Foronetimedetection，itcouldbecompletedat60℃in60minutes，andthedete

7、ctionsensitivitywas1．35CFU/mL．Thedetectionre-sultscouldbeobservedunderUVlampwithSYBＲGreenⅠ．Bydetectingthepurifiedwatersamplesincorpo-ratedwithknownEscherichiacoli，theresultsshowedthattheestablishedLAMPmethodownedadvantagesofstrongspecificity，highsensitiv

8、ityandeasytooperation．ItwassuitableforrapiddetectionofpathogenicEsch-erichiacoliinpurifiedwater，andithadimportantsignificanceforpreventionandcontrolofinfectionfromEscherichiacoli．KeywordsPurifiedwater;Loop－mediatedisotherm