miR-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响.pdf

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1、2017年1月基础医学与临床January2017第37卷第1期Basic＆ClinicalMedicineVol．37No．1文章编号:1001-6325(2017)01-0080-07研究论文miＲ-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响*陈立文，朱琳琳，季倩，朱灏，任怡稚，樊仲国，李小波，高晓飞，张瑶俊，田乃亮(南京医科大学附属南京医院南京市第一医院心内科，江苏南京210006)摘要:目的探讨miＲ-30a在大鼠心肌梗死后对心肌纤维化的作用机制及对心功能的影响。方法构建携带大鼠miＲ-30a基因的载体，在HEK293细胞中包装病毒载体rAA

2、V9-miＲ-30a及阴性对照rAAV9-miＲ-30a-NC，提取纯化后通过冠脉注射方法分别传导PBS缓冲液、rAAV9-miＲ-30-NC和rAAV9-miＲ-30a至大鼠心脏，再建立大鼠心肌梗死模型，分别设为PBS组、miＲ-30-NC组和miＲ-30a组，同时设立假手术组(sham组)。用心脏彩色多普勒超声检测心功能指标，包括短轴缩短率(FS)及左室射血分数(LVEF);Masson染色观察心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;实时荧光定量PCＲ(real-timePCＲ)检测心肌miＲ-30a及TGF-β1和CTGFmＲNA表达;蛋白

3、印迹法(Westernblot)检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达。结果miＲ-30a组心功能较PBS组及miＲ-30-NC组显著改善(P＜0.05)。miＲ-30a组的心肌CVF及Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较PBS组及miＲ-30-NC组显著降低(P＜0.01);miＲ-30a组心肌TGF-β1mＲNA及蛋白表达水平与PBS组及miＲ-30-NC组比较显著下降(P＜0.001);CTGFmＲNA及蛋白表达水平较PBS组及miＲ-30-NC组显著降低(P＜0.001)。结论miＲ-30a过表达能下调心肌梗死后心肌TGF-β1、CTGFmＲNA及蛋白水平，

4、从而减少心肌胶原产生，抑制心肌纤维化，进而改善心功能。关键词:miＲ-30a;心肌梗死;心肌纤维化;转化生长因子β1;结缔组织生长因子中图分类号:Ｒ36文献标志码:JFunctionofmiＲ-30ainmyocardialfibrosisandit'simpactoncardiacfunctioninratswithmyocardialinfarctionCHENLi-wen，ZHULin-lin，JIQian，ZHUHao，ＲENYi-zhi，FANZhong-guo，LIXiao-bo，*GAOXiao-fei，ZHANGYao-jun，TIANNai-lia

5、ng(Dept．ofCardiology，NanjingFirstHospital，NanjingHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity，Nanjing210006，China)Abstract:ObjectiveToexplorethepotentialroleandfunctionofmiＲ-30ainmyocardialfibrosisaftermyocardi-alinfarction(MI)．MethodsWeconstructedtheAAVplasmidvectorwhichcarriedthemiＲ-

6、30ageneofrat．Therecombinantplasmidwasdetectedbygenesequencing，enzymedigestionandPCＲ．ViruswaspackagedintoHEK293cellsandvirustiterwasdeterminedafterextractionandpurificationbyPCＲ．PBSfluid，rAAV9-miＲ-30a-NCandrAAV9-miＲ-30aweretransmitedtoratheartsfromPBSgroup，miＲ-30a-NCgroupandmiＲ-30agroup

7、respectivelythroughtranscoronaryinfusionbeforeanteriordescendingcoronaryarteryligation．Shamgroupwassetupatthesametime．After4weeks，heartfunctionwasmonitoredbyserialechocardiography，includingfractionalshortening(FS)，andleftventricularejectionfraction(LVEF)．Massonstainingwasusedtocalcul