大鼠左冠状动脉不同结扎时间对心肌梗死面积及心功能的影响

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1、大鼠左冠状动脉不同结扎时间对心肌梗死面积及心功能的影响作者：杨建业,张迎春,王明江,唐俊明,汤敏,王家宁[摘要]目的:探索大鼠左冠状动脉前降支不同结扎处理后，对心肌形态学及心功能的影响，以建立适合移植干细胞再生修复心肌梗死研究的稳定、可靠和更合乎发病机理的动物模型。方法:雄性ethodsMyocardialinfarctionale-6200型生理记录仪（成都仪器厂）。1.3模型制作及评价取g/kg腹腔注射麻醉。无菌条件下气管切开、插管、上动物呼吸机正压辅助呼吸(潮气量3ml,频率60次/分)。胸部去毛，消毒，沿左锁骨中线纵行切开皮肤2cm，在

2、第四或五肋间钝性分离肌层，打开胸腔,剪开心包,轻压右侧胸廓，快速挤出心脏，在左冠状动脉前降支中上1/3处行结扎15min、30min、45min或60min后再灌以及结扎非再灌处理，随后把心脏放回胸腔。逐层关胸,待动物苏醒后拔气管插管。术后每只大鼠每天肌注青霉素10万U，维持1周。1.3.1心功能检测：颈部正中切开，暴露并钝性分离左颈总动脉，用肝素（2mg/kg）静脉注射肝素化后，将自制导管经左颈总动脉插入左心室，导管另一端连接压力传感器，通过多导生理记录仪同步记录左室收缩压（LVSP），左室舒张末压（LVEDP）及左室最大压力上升及下降速度（

3、±dp/dtmax）。同样，股动脉插管测收缩压（ASP）、舒张压（ADP）。1.3.2心肌梗死面积测定方法：心肌梗死后一月取出大鼠心脏。用生理盐水洗去血污，剔除血管脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，将全心室置-20℃冻存5min后，从心尖至心底横切成1～2mm的心室组织切片，游离出每个左心室组织切片置于1%TTC溶液中，37℃温孵10min，则非心肌梗死区染色为红色，梗死区不染色。在透明纸上描出轮廓，扫描后接入图像分析系统测定左室及梗塞区面积，并计算出梗死面积百分比。TTC染色后的心室肌组织用4%多聚甲醛溶液固定。梗塞面积%=左心室组织切片梗

4、塞区面积/左心室组织切片总面积×100%1.3.3病理组织学观察：随机从各组心肌梗塞1d、1周或4周后大鼠选出4~6只，麻醉后开胸，取出心脏，用生理盐水洗去血污,剔除血管脂肪等非心肌组织。置4%多聚甲醛溶液固定左心室组织切片8~12h，入30%蔗糖直至标本沉底。恒冷切片机在注射点附近连续横切片，片厚10μm，HE染色后镜检。1.3.4统计分析：统计每组数据，数据以均数±标准差（x±s）表示。实验数据用SPSS10.0统计软件分析，组内比较：t检验；组间比较：方差分析；率的比较：Fisher确切概率法。P值＜0.05为有统计学意义。2结果2.1不

5、同结扎时间对大鼠成活率的影响大鼠左冠状动脉前降支中上1/3处不同结扎时间处理后，观察一月内的成活率发现：结扎(60min)再灌组的大鼠成活率低于结扎(15min、结扎30min)再灌组（P＜0.05)，而与其它组比较无差异。说明在左冠状动脉前降支中上1/3处结扎造成心肌梗死的情况下，结扎(45min、60min)再灌后两组大鼠的死亡率无差异（见表1）。表1不同结扎时间对大鼠成活率的影响（略）注：与结扎15min、结扎30min、结扎非再灌比较*P＜0.05；与结扎45min比较P＞0.052.2心肌梗死病理过程的形态学观察大鼠左冠状动脉前降支中

6、上1/3处结扎(15min、30min、45min、60min)再灌或结扎非再灌后1d、1周、4周，取左心室冰冻切片，HE染色后，在低、高倍镜下观察各组大鼠左室心肌组织切片心肌形态学变化。结扎15min再灌组只见非常少量的梗死灶。结扎(30min、45min、60min)再灌或结扎非再灌各组，镜下见:假手术组心肌未见异常(图1)。结扎后1d大鼠心肌梗塞区边缘往往与周围心肌相互交错,因而边界不清，并有大量炎症细胞从周围向梗塞区中央浸润，左心室壁厚度没有明显变化(图2)。结扎后1周后可见左室前壁形成边界清楚的圆形梗死灶,直径大小不等(1~3mm)、

7、呈蜡黄色,梗塞区心肌大量坏死,坏死心肌结构紊乱，炎症细胞浸润明显减少，但有少量散在心肌残存，部分梗塞区出现肉芽组织,并伴随大量毛细血管增生，纤维化不明显(图3)。4周后,梗塞区中央成纤维细胞逐渐减少,肉芽组织逐渐被疤痕取代(图4)。左心室壁厚度，结扎(45min、60min)再灌和结扎非再灌各组（图5、6），均较假手术组和结扎(15min、30min)再灌组(图7、8)明显变薄。说明冠脉结扎45min以上的大鼠心肌梗死病理变化过程更典型。2.3不同结扎时间对大鼠心肌梗死面积的影响各组大鼠处理4周后，取左心室切成1~2mm厚心室组织切片，TTC染

8、色10min后，显示非梗死区，心肌组织呈红色；梗死区不染色。在图像分析系统测定左心室梗塞区与左心室总面积比发现（表2）：冠脉结扎（45min或60mi