骨髓间充质干细胞不同时期移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

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1、骨髓间充质干细胞不同时期移植对心肌梗死大鼠心功能的影响侯志峰，龚卫琴，张珊红，王莹，王跃民，李源【关键词】骨髓间充质干细胞；心肌梗死；静脉移植；心功能　　Effectsofbonemarrocelltransplantationatdifferenttimeonheartfunctionofratsyocardialinfarction　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheoptimaltimeforbonemarroesenchymalstemcells(MSCs)transplantationaftermyocardialinfarction(MI).METH

2、ODS:MItherats,purified,proliferatedandthey(1mL)eculturemedium(1mL)yocardialischemicsizeandinfarctsizeyocardialischemicsizeandinfarctsizeof1daygroupafterMIhadnodifferencefromthoseofthecontrolgroup(P＞0.05).Theimprovementofheartfunctionin1,2,and4oredistinctthanthatof1daygroup(P0.05);myocardialischemi

3、csizeandinfarctsizeallerthanthoseof1daygroup(P0.05).Amongthetransplantationgroups,thetreatmenteffectof2ightbetheoptimaltimeforMSCstransplantation.　　【Keyarroesenchymalstemcells；myocardialinfarction；intravenoustransplantation;heartfunction　　【摘要】目的：探讨心肌梗死后骨髓间充质干细胞(MSCs)移植的最佳时间.方法：结扎大鼠左冠状动脉制备心肌梗死模型，将分

4、离培养的大鼠MSCs经尾静脉分别移植到1d,1,2,4L/L的乙醇浸泡15min.无菌条件下分离股骨和胫骨，用含体积分数150mL/LFCS的LDMEM培养基反复冲洗骨髓腔，得到的细胞悬液接种到培养瓶，置于37℃，50mL/LCO2孵箱中培养，72h首次换液去除未贴壁细胞，以后每2d换液1次.待细胞覆盖到瓶底的80%时，用胰酶消化传代.　　1.2.2大鼠心肌梗死模型的建立采用结扎左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型.30g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（1.5mL/kg）大鼠，颈、胸部术区消毒，气管插管，连接呼吸机，在心电监护下，左前第3～4肋间隙开胸，打开心包，暴露心脏，于左心耳下方3

5、mm处用7/0号无损伤丝线连同一小束心肌一起结扎左冠状动脉前降支，结扎后左室壁变苍白，心电监护可见R波振幅升高，ST段抬高，证明结扎成功.术后逐层关胸，观察大鼠呼吸情况，平稳后拔除气管插管，术后给予抗生素预防感染，放入动物笼喂养.　　1.2.3干细胞移植分别在模型制备成功后1d，1,2和4L细胞悬液通过尾静脉注射到各不同干细胞移植组大鼠体内，对照组则在模型制作成功1d后注射1mL无血清DMEM培养液.饲养4L/kg）大鼠，分离右侧颈总动脉，显微镜下插入内充肝素生理盐水的塑料管至左心室腔，用多道生理记录仪记录左心室收缩舒张压差（LVSEDP）和左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax

6、)以反映左心室收缩与舒张功能.所有电信号均用计算机软件分析处理.　　1.2.5心肌缺血和梗死面积的测量〔5〕测定左心功能后，从左心室导管推注伊文氏蓝2mL，5min后迅速剪下心脏，冻存于-20℃.用心脏切片器垂直于心脏长轴切成1mm厚的薄片，置于含TTC的培养皿中，37℃孵育15min.用数码相机拍照并输入计算机.采用单盲法分别将伊文氏蓝染色区（蓝染，非缺血区）、TTC染色区（缺血但仍存活组织）以及非TTC染色区（苍白色，梗死心肌）用SigmaScan面积测算软件进行计算处理.缺血范围以每一心脏总梗死面积（INF）占总缺血面积的（AAR）的百分比表示.　　统计学处理：试验数据用x±s表示；

7、多组比较采用单因素方差分析，用LSDt检验做多重比较，所有数据均用SPSS软件处理,检验水准设为0.05（双侧）.　　2结果　　2.1MSCs的形态观察细胞培养24h后发现细胞浓度很大，大部分为大鼠骨髓中的红细胞；多次换液后悬浮于培养液中的红细胞基本去除，只留下贴壁生长的MSCs，呈细而小的长梭形或多边形，以集落方式增殖.　　2.2心肌梗死模型的鉴定急性心肌梗死模型制作后4o后，发现即刻移植组并不引起心功能和瘢痕大小的明