不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定.ppt

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1、实验九不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定实验目的及要求1、学会常用实验材料的培养及处理；2、掌握植物脯氨酸含量的测定方法；3、掌握常用实验仪器的使用操作及提高实验动手能力；4、学会文献的查阅与整理，熟悉实验设计的一般原则、方法步骤，提高自己的实验设计能力、操作能力、独立分析问题、解决问题能力和综合运用能力。实验内容及条件：实验内容：1、实验植物种子的处理及幼苗的培养；2、不同渗透胁迫条件下的胁迫处理；3、脯氨酸含量的测定。条件：（使用仪器）1、恒温培养箱2、分光光度计3、恒温水浴锅4、恒温恒湿光照培养箱方法步骤1、根据实际情况进行实验分组，实验小组人数控制在3～4人，

2、并选定小组长；2、实验课题的选定，实验小组分工，实验用品的领取，实验要求的讲述；3、各组实验工作安排；4、实验工作（1）材料的选择、培养及处理；（2）脯氨酸含量的测定；（3）实验课题总结及实验报告。实验建议课题（一）实验材料的选择可选择不同实验材料，但要求易培养、容易得到。（二）渗透胁迫处理；不同渗透胁迫条件、胁迫时间对植物的胁迫处理；（三）不同渗透胁迫条件对植物脯氨酸积累的影响采用张志良的方法进行。脯氨酸含量的测定实验原理当植物遭受渗透胁迫，造成生理性缺水，植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株内的水分状况。所以其含量可作为植物缺水的参考指标。在酸性条件下，茚三酮

3、与脯氨酸反应生成红色化合物。其含量与色度成正比，故可用分光光度计测定。实验器材与试剂1.实验仪器：722型分光光度计，水浴锅，烧杯，移液管。2.实验试剂：冰醋酸，3%磺基水杨酸，标准脯氨酸溶液，酸性茚三酮试剂。实验步骤1.标准曲线的绘制（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0及6.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为2，4，6，8

4、，10μg/ml实验步骤3）取5支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液，加入2ml蒸馏水，2ml3%磺基水杨酸、2ml冰醋酸和4ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中显色1h。（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置分层，使色素全部转至甲苯溶液。（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯（红色甲苯相）溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线。实验步骤1.取地上部材料0.5g剪碎后，加5ml3%磺基水杨酸研磨，匀浆移至离心管，

5、在沸水中提取10min，冷却至室温后，3000r/min离心10分钟，取上清液2ml，分别加蒸馏水2ml、冰醋酸2ml和2.5%茚三酮4ml，置于沸水浴显色1h。冷却后于520nm处比色。从标准曲线上查出脯氨酸含量。注意事项1.选取实验材料时，应选生长较好的叶片，不可选用已枯死的叶片。且应避免选取发黄、发红的叶片，以免影响实验结果。2.茚三酮虽无色，但与脯氨酸会发生显色反应，故吸取时应小心避免与皮肤接触。3.制作标准曲线时，应用2ml蒸馏水+2ml3%磺基水杨酸+2ml冰醋酸+4ml茚三酮比色。