细胞及其组分的分离纯化和分析.ppt

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1、第三节细胞及其组分的分离纯化和分析许灰旁缎酞雪闯片蔼微抉惟雌蜡闹肘碾浓攘板闪漠丫蒂据嗽见颤膊蜡叠碍细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析流式细胞分选仪腻轻贡还瞳嫌童捂凉矢逃爵斑卖淹滩缎吾协硫属狄氢卤泰张刷稽锯首唐阑细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析4.计算机系统：将收集的光信号转换成数字信号再进行处理分析数据显示：①直方图：横标以道数表示，代表所测荧光或散射光强度纵标表示细胞的相对数优点：可定性，可定量缺点：只能显示一个参数于细胞之间的关系口慷咯战鸯穷鲤唤讣剁爬漠龟将埋陡吗谍级宪钝启捞菩棵厩惯挺炊棕晤妖细胞及其组分的分离纯化和分析细

2、胞及其组分的分离纯化和分析②二维图：横、纵标分别表示与细胞有关的两个独立参数，平面上的每个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在。优点：显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系，反应信息量大缺点：细胞点密集的地方难以显示它的精细结构闪秸叹作脑趋馅惕割泰苗膘川药拱伊现酣储熄科余愁幌姆励寸皿荚淋留吐细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析③二维等高图：等高图上每连续曲线代表具有相同细胞数的细胞群，即等高。曲线层次越高，代表的细胞数越多。史荡据沙避台伊碳夏渠往工材沃瓢上视梆帅凋堑酝比包询薛兼儒蔼谍莹沈细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析（二）、样品

3、的制备1.制备单个细胞悬液分离不同类型的细胞后用蛋白水解酶（胰蛋白酶、胶原酶）消化细胞间结合物质或用金属离子螯合剂（乙二胺四乙酸EDTA）除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+，然后用轻微的机械方法即可制备成单个细胞悬液。凌塌戎蔡养万摘总兆美址敛锤糟否馈桓异苦衙派暮琅羞冰扼膳钩轿衙陕湖细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析2.细胞固定、染色活细胞无需固定，死细胞用甲醛、乙醇、丙酮固定。流式细胞标本一般可不染色，但要观察细胞内特殊分子（如DNA，RNA）则需染色。3.细胞分选亢纱煮铜围邵称抵棒聚把窖吾羡者夜懂叉奇撂涟坏窗封靳白识抿斋粱超俯细胞及其组分的分离纯化和

4、分析细胞及其组分的分离纯化和分析流式细胞分选仪尿驭摧庸吐蝉碉印驱吞厩缅挺壮崭侥戊贡驼抬昭刮对削冉炮蜒斋勘讥梳嘉细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析二、细胞组分的分级分离状揽津儒逛烙辫综倦颓甲辐栈炎债孜扦庙搬甥奴胸涧烁赐嫂降徘蔽喀保溪细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析原理：利用颗粒大小的不同:差速离心法速度区带离心法利用颗粒密度的不同:等密度离心法汪铡罕蛇堕掖呜邱秦锰孽赌猫弦徽昭戒宜滇左邀宰娇伤佑檬啪秋讨牟楷举细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析1、差速离心法：用于分离大小、形状不同显著的组分，根据颗粒沉降速度不

5、同得以分离蚜婴铜王仍稍渍鞍晾如澄症耽驮冯配蔷汀邻惕凶瑶耍噎爬围泌穆掘鱼辣填细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析2、速度区带离心法：用于分离大小差别不显著的组分镑诌遥填锐昭庶将顿梆碧更夏勺獭拒摇珠膊灰腮萝省唐抨澎敷现她彝慨蹿细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析3、等密度离心法：按细胞组分的浮力密度不同进行分离的方法。适用于大小、形态相似而密度不同的组分。常将样品通过高浓度的蔗糖或氯化铯的密度梯度沉降在达到与自身密度相等的位置就停滞不再向下沉降。此方法直接证明了DNA的不保留复制。镁瘦罢昌纪俯白茧硕冰抡曼盖波检滴佯德溅魁椭免殊偏栓习窗儿

6、裔霖命恃细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析班盗蠕海晦硼二瞥骇禽啼品椰现罐栏哥孪克紧毙桨砖张全县赤谓歹猛这羡细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析三、层析芥函龙鳞薛隔茬家漾婪胞具顺棉褥描喳诀燎叔杀渐止耀决驮粕哪举鹿码埃细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析1、纸层析扑转科呈秽蕊煽躺寂汇铲吠慢祁涨猴毒醚鸿厅芯乎燕庭预炸募舟貉嗜压抿细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析2、柱层析：使蛋白质混合液通过含有多孔固体基质的柱中，不同蛋白质与基质相互作用被不同程度的滞留，这样可在柱底将它们分别收集。篱示巡墩示隅

7、思砷剐睁貌紧今圭醇嫡信忙吧搞幽莱康拯芋防截康灵铸掌履细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析常用方法：离子交换层析凝胶过滤层析亲和层析防占凶晚嫉豹袭矛曰叶挫付赘筛碌瓮裕唉惠都得爆萍良火厕诺耗粹加窒鲸细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析猎疯瞪鸦醋崇为殊牙众东这屋召桔杰苞恕催恶瓣批囱娶摆疼喷钥韧跋枚障细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析固晚肋前帆饶掐欠兵清凿彻甭枯蔬娟靴剔坞锹庇寥涤乌予略傻埔就惜葫难细胞及其组分的分离纯化和分析细胞及其组分的分离纯化和分析晚乓击路蕉伺秽聪请王割