正文描述:《实验九--细胞组分的分级分离.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、细胞组分的分级分离实验九通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分,了解其原理、过程及作用。实验目的细胞内不同结构的比重和大小都不同。在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理,用不同的转速的离心法,可将细胞内各种组分分级分离出来。实验原理速度逐渐提高,样品按大小先后沉淀实验内容细胞核的分离提取高速离心分离提取线粒体细胞核的分离提取步骤:1.椎脱臼法法处死小鼠,迅速开腹取肝脏,剪成小块,置于盛有0.9%NaCl烧杯中,反复洗涤,除去血污,用滤纸吸去表面的溶液。2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中,取8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液,先加入少量该溶
2、液于平皿中,尽量剪碎组织后,再全部加入。3.将剪碎的肝组织倒入匀浆管中,使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中,研磨3~5次,用8层湿纱布过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片①,做好标记,自然干燥。4.将装有滤液的离心管配平后,放入离心机,2500r/min离心15分钟;⑴取上清液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中,待分离线粒体用;⑵同时涂一张上清液片②做好标记,自然干燥;⑶余下的沉淀物进行以下步骤。5.用6ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液,悬浮沉淀物,以2500r/min离心15分钟弃上清,将残留液体用吸管吹打成悬液,滴一滴于干净的载玻片上,涂片③,自然干
3、燥。6.将①、②、③涂片用1%甲苯胺兰染色后盖上盖片即可观察。高速离心分离提取线粒体步骤:1.将上述装有上清液的高速离心管,从装有冰块的烧杯中取出,配平后,以17000r/min离心20分钟,弃上清,留取沉淀物。2.加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙液1ml,用吸管吹打成悬液,以17000r/min离心20分钟。将上清吸入另一试管。留取沉淀物,加入0.1ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液。3.取沉淀物上清液和悬液,分别滴一滴于干净的载玻片上(分别标记为④、⑤),涂片,各滴一滴0.02%詹纳斯绿B染液,盖上盖片染20分钟。4.油镜下
4、观察,颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色。1.研磨时要在低温进行。2.过滤前要先将纱布湿润。3.离心前要注意配平。注意事项1.简要说明分级分离细胞的原理及其意义。2.比较一下分离细胞核时涂片①、②、③有什么不同?涂片③在你的实验结果中纯度如何?3.描述一下涂片⑤所见结果。作业与思考谢谢大家
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