实验十六细胞核与线粒体的分级分离（选做,综合性实验,8.ppt

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1、实验十六细胞核与线粒体的分级分离(选做，综合性实验，8学时）实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成，理化特性及其功能的主要手段。实验原理分级分离（Fractionation）由低速到高速离心逐渐沉降，先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清夜中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核，线粒体等得以分离。细胞核的分离提取步骤：小白鼠肝脏（用生理

2、盐水洗涤）将湿重1g的肝组织放于培养皿中，加入8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液剪碎肝组织倒入匀浆器中（冰浴）研磨，过滤，涂片，做好标记，自然干燥。用1%甲苯胺兰染色观察.(1)接上步滤液以2500rpm离心15min,上清夜涂片(2)干燥。用1%甲苯胺兰染色观察余下沉淀用6ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液悬浮沉淀物,以2500rpm离心15min,弃上清液将沉淀配制成悬液,涂片,（3）干燥。用1%甲苯胺兰染色观察结果（1）（2）（3）用1%甲苯胺兰染色后盖片即可观察。高速离心分离提取线粒体上清液分

3、离线粒体用。以17000rpm离心20min，弃上清液，留沉淀。加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液1ml，以以17000rpm离心20min，沉淀物加入0.1ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液,制成悬液.取上清液和悬液,分别滴片,各滴一滴0.02%詹纳斯绿B染色20min.实验结果油镜下观察,颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色.思考题