食品中维生素B6的测定.doc

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1、GBxxxx—xxxx食品安全国家标准食品中维生素B6的测定（征求意见稿）201x-xx-xx实施201x-xx-xx发布中华人民共和国卫生部发布1.1.1.1　2010-06-01实施2010-××-××发布GBxxxx—xxxx前言本标准代替GB/T5009.154-2003《食品中维生素B6的测定》、GB5413.13-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定》。本标准与GB/T5009.154-2003、GB5413.13-2010相比，主要变化如下：——标准名称修改为“食品安全国家标准食品中维生素B6的测

2、定”；——标准规定了两种方法：第一法为高效液相色谱法，第二法为微生物法；——统一了样品制备方法；——在附录中增加了维生素B6（吡哆醇、吡哆醛、吡多胺）标准储备溶液的校正方法。9GBxxxx—xxxx食品安全国家标准食品中维生素B6的测定1　范围本标准规定了食品中维生素B6的测定方法。本标准第一法为高效液相色谱法，第二法为微生物法，适用于食品中维生素B6的测定。第一法高效液相色谱法2　原理试样在稀酸环境中高温水解，定容过滤后经反相色谱柱分离样液中维生素B6的三种衍生物（吡哆醇、吡哆胺、吡哆醛），高效液相色谱-荧光检测器检测，以保留时间定

3、性，外标法定量。3　试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1庚烷磺酸钠（C7H15NaO3S）。3.1.2冰乙酸（C2H4O2）。3.1.3三乙胺（C6H15N）：色谱纯。3.1.4甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.5盐酸（HCl）。3.1.6硫酸（H2SO4）。3.1.7氢氧化钠（NaOH）。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液（0.1mol/L）：量取9mL盐酸，用水稀释并定容至1000mL。3.2.2硫酸溶液（0.2mol/L）：于2000mL烧杯中加入700mL

4、水，11.2mL硫酸，用水稀释至1000mL。3.2.3硫酸溶液（0.5mol/L）：于2000mL烧杯中加入700mL水，28mL硫酸，用水稀释至1000mL。3.2.4氢氧化钠溶液（10mol/L）：准确称取200g氢氧化钠，加400mL水溶解后，用水定容至500mL。3.3标准品3.3.1盐酸吡哆醇（C8H12ClNO3,CAS:58-56-0）标准品：纯度≥99%。3.3.2盐酸吡哆醛（C8H10ClNO3,CAS:65-22-5）标准品：纯度≥99%。3.3.3双盐酸吡哆胺（C8H14Cl2N2O3,CAS:524-36-7

5、）标准品：纯度≥99%。9GBxxxx—xxxx3.4标准溶液配制3.4.1吡哆醇标准储备液（1mg/mL）：准确称取60.8mg盐酸吡哆醇标准品，用0.1mol/L盐酸溶液溶解后定容到50mL，在-20℃冰箱中避光贮存，保存期1个月。标准储备液在使用前需要进行浓度校正，校正方法参照附录A。3.4.2吡哆醛标准储备液（1mg/mL）：准确称取60.9mg盐酸吡哆醛标准品，用0.1mol/L盐酸溶液溶解后定容到50mL，在-20℃冰箱中避光贮存，保存期1个月。标准储备液在使用前需要进行浓度校正，校正方法参照附录A。3.4.3吡哆胺标准储

6、备液（1mg/mL）：准确称取71.7mg双盐酸吡哆胺标准品，用0.1mol/L盐酸溶液溶解后定容到50mL，在-20℃冰箱中避光贮存，保存期1个月。标准储备液在使用前需要进行浓度校正，校正方法参照附录A。3.4.4维生素B6混合标准中间液（20μg/mL）：分别准确吸取吡哆醇、吡哆醛、吡多胺的标准储备液各1.00mL，用0.1mol/L盐酸溶液稀释并定容至50mL。临用前配制。3.4.5维生素B6混合标准系列工作液：分别准确吸取维生素B6混合标准中间液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL，至100mL容量瓶中，

7、用水定容。该标准系列浓度分别为0.00μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60μg/mL、1.00μg/mL。临用前配制。1　仪器和设备4.1高效液相色谱仪，带荧光检测器。4.2天平：感量1mg和0.01mg。4.3高压釜。4.4pH计：精度0.01。4.5涡旋混合器。4.6超声波振荡器。4.7分光光度计。5分析步骤5.1试样制备5.1.1试样预处理试样切碎后用组织捣碎机均质；颗粒状试样磨成粉混匀。试样预处理过程中要避免试样长时间处于高温环境下。取粉碎均质后的试样500g，分装入洁净棕色磨口瓶中，密封，并做好标记，

8、避光低温存放备用。5.1.2试样溶液的制备称取试样2~10.0g（精确至0.01g）放入100mL三角瓶中，加约60mL0.2mol/L硫酸溶液。放入高压釜121℃下水解3h，取出冷却，用10.0mol/L氢氧化钠溶液和