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1、中华人民共和国国家标准GB5009.154—2016食品安全国家标准食品中维生素B6的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB5009.154—2016前言本标准代替GB/T5009.154—2003《食品中维生素B6的测定》、GB5413.13—2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定》。本标准与GB/T5009.154—2003相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中维生素B6的测定”;———增加了高效液相色谱法。ⅠGB5009.1
2、54—2016食品安全国家标准食品中维生素B6的测定1范围本标准规定了食品中维生素B6的测定方法。本标准第一法为高效液相色谱法,适用于添加了维生素B6的食品测定;第二法为微生物法,适用于各类食品中维生素B6的测定。第一法高效液相色谱法2原理试样经提取等前处理后,经C18色谱柱分离,高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量测定维生素B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的含量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1辛烷磺酸钠(C8H17NaO3S)。3.1.2冰乙酸(C2H4O2)。3.1.3三乙胺(C
3、6H15N):色谱纯。3.1.4甲醇(CH4O):色谱纯。3.1.5盐酸(HCl)。3.1.6氢氧化钠(NaOH)。3.1.7淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液(5.0mol/L):量取45mL盐酸,用水稀释并定容至100mL。3.2.2盐酸溶液(0.1mol/L):吸取9mL盐酸,用水稀释并定容至1000mL。3.2.3氢氧化钠溶液(5.0mol/L):称取20g氢氧化钠,加50mL水溶解,冷却后,用水定容至100mL。3.2.4氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称取0.4g氢氧化钠,加50mL水溶解,冷却后,用水定容至100m
4、L。3.3标准品3.3.1盐酸吡哆醇(C8H12ClNO3,CAS号:58-56-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书1GB5009.154—2016的标准物质。3.3.2盐酸吡哆醛(C8H10ClNO3,CAS号:65-22-5):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.3双盐酸吡哆胺(C8H14Cl2N2O3,CAS号:524-36-7):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.4标准溶液配制3.4.1吡哆醇标准储备液(1mg/mL):准确称取60.8mg盐酸吡哆醇标准品,用0.1mol/L盐酸溶液
5、溶解后定容到50mL,在-20℃下避光保存,有效期1个月。3.4.2吡哆醛标准储备液(1mg/mL):准确称取60.9mg盐酸吡哆醛标准品,用0.1mol/L盐酸溶液溶解后定容到50mL,在-20℃下避光保存,有效期1个月。3.4.3吡哆胺标准储备液(1mg/mL):准确称取71.7mg双盐酸吡哆胺标准品,用0.1mol/L盐酸溶液溶解后定容到50mL,在-20℃下避光保存,有效期1个月。3.4.4维生素B6混合标准中间液(20μg/mL):分别准确吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺的标准储备液各1.00mL,用0.1mol/L盐酸溶液稀释并定容至50mL。临用前配制
6、。3.4.5维生素B6混合标准系列工作液:分别准确吸取维生素B6混合标准中间液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL,至100mL容量瓶中,用水定容。该标准系列浓度分别为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60μg/mL、1.00μg/mL。临用前配制。注:标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参照附录A。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪:带荧光检测器。4.2天平:感量1mg和0.01mg。4.3pH计:精度0.01。4.4涡旋混合器。4.5超声波振荡器。4.6分光光度计。4.7恒温培养箱,或性能相当者。5
7、分析步骤5.1试样制备5.1.1含淀粉的试样a)固体试样:称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.01g),于150mL锥形瓶中,加入约25mL45℃~50℃的水,混匀。加入约0.5g淀粉酶,混匀后向锥形瓶中充氮,盖上瓶塞,置50℃~60℃培养箱内约30min。取出冷却至室温。b)液体试样:称取混合均匀的液体试样约20g(精确至0.01g)于150mL锥形瓶中,混匀。加入约0.5g淀粉酶,混匀后向锥形瓶中充氮,盖上瓶塞,置50℃~60℃培养箱内约30min。取出冷却至室温。5.1.2不含淀粉的试样a)固体试样:称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.01g),
8、于150mL锥形瓶中,加入约252GB
