GBT5009.154-2003 食品中维生素B6的测定.pdf

《GBT5009.154-2003 食品中维生素B6的测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.154-2003代替GB/T17407-1998食品中维生素B6的测定DeterminationofvitaminB6infoods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部*六中国国家标准化管理委员会‘’.‘GB/T5009.154-2003前言本标准对应于《AOAC.45维生素和营养素部分43.229食物中维生素B。的微生物测定法》(1991,年版)。本标准与AOAC43.229的一致性程度为非等效。本标准代替GB/T17407-1998(食品中维生素

2、Bs测定》。本标准按GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所。本标准主要起草人:沈湘、周瑞华、杨晓莉、王光亚。原标准于1998年首次发布，本次为第一次修订。GB/T5009.154-2003食品中维生素B6的测定范围本标准规定了用微生物法测定食品中的维生素B6的含量。本标准适用于各类食品中的维生素B‘的测定。本标准也适用于饲料中的维生素B6的测定。本方法检出限为。.1ng*线性范围为。1ng-6n

3、g,2原理食品中某一种细菌的生长必须要有某一种维生素的存在，卡尔斯伯(SaccharomycesCarlsbrgensis)酵母菌需在有维生索B6存在的条件下才能生长，在一定条件下维生素Bs的量与其生长呈正比关系。用比浊法测定该菌在试样液中生长的浑浊度，与标准曲线相比较得出试样中维生素B6的含量。3试荆3.1琼脂。3.2毗哆醇Y培养基。3.30.22mol/L硫酸溶液，于2000mL烧杯中加人700mL水，12.32mL硫酸(HZSOO，用水稀释至1000mL.3.40.5mol/L硫酸溶液，于2000ml烧杯中加人700mL水，28mL硫酸(

4、H2SO4)用水稀释至1000mL.3.510mol/L氢氧化钠溶液，溶200g氢氧化钠于水中，稀释至500mL.3.60.1mol/L氢氧化钠溶液，取10mL10mol/L氢氧化钠，用水稀释至1000mL.3.7培养基:称取毗哆醇Y培养基5.3g,溶解于100mL蒸馏水中。.告:本标准所用毗哆醉Y培养荃不得含维生紊B6生长因子。3.8毗哆醇标准储备液(100jLg/mL):称取122mg盐酸毗哆醇标准溶于1L25%乙醇中，保于4℃冰箱中，稳定1个月。3.9毗哆醇标准中间液(1[Ag/mL):取1mL毗哆醇标准储备液，稀释至100mL.3.10

5、琼脂培养基:毗哆醇Y培养基5.3g,琼脂1.2g,稀释至100mL,3.11生理盐水:取9g氯化钠溶于1000mL水中。3.12嗅甲酚绿(0.4g/L)溶液，称取。1g澳甲酚绿于研钵中，加1.4mL0.1mol/L氢氧化钠研磨，加少许水继续研磨，直至完全溶解，用水稀释到250mL,4仪器和设备4.1电热恒温培养箱。4.2高压釜。4.3液体快速混合器。4.4离心机.4.5光栅分光光度计。4.6硬质玻璃试管。GB/T5009.154-20035分析步骤5.1菌种的制备及保存(避光处理)5.1.1以卡尔斯伯酵母菌(SaccharomycesCarls

6、bergensisATCCNo.9080简称SC)纯菌种接人2个或多个琼脂培养基管中，在30℃士。.5℃恒温箱中保温18h-20h，取出于冰箱中保存，至多不超过两星期。保存数星期以上的菌种，不能立即用作制备接种液之用，一定要在使用前每天移种一次，连续2d^-3d，方可使用，否则生长不好。5.1.2种子培养液的制备加。.5mL50ng/mL的维生素氏标准应用液于尖头管中，加人5.0mL基本培养基，塞好棉塞，于高压锅121℃下消毒10min，取出，置于冰箱中，此管可保留数星期之久。每次可制备2管~4管。5.2试样处理(整个步骤需要避光)5.2.1称

7、取试样0.5g-10.0g(维生素B。含量不超过10ng)放人100mL三角瓶中，加72mL0.22mol/L硫酸。放人高压锅121℃下水解5h，取出冷却，用10.0mol/L氢氧化钠和。.5mol/L硫酸调pH值至4.5，用澳甲酚绿做指示剂。(指示剂由黄一黄绿色)，将三角瓶内的溶液转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL,滤纸过滤，保存滤液于冰箱内备用(保存期不超过36h),5.2.2接种液的制备使用前一天，将卡尔斯伯酵母菌菌种由储备菌种管移种于已消毒的种子培养液中，可同时制备两根管，在30℃士0.5℃的恒温箱中培养18h-20h。

8、取出离心10min(3000r/min)倾去上部液体，用已消毒的生理盐水淋洗2次，再加10mL消毒过的生理盐水，将离心管置于液体快速混合器上混合，使菌