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1、人才龈成纤维细胞的原代培养及鉴宦［摘耍］H的：分离培养人牙龈成纤维细胞,为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验条件。方法:用组织块法培养人牙龈成纤维细胞，并进行形态学和免疫学鉴定。结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形或星形，免疫学鉴定抗波形丝蛋白抗体阳性，抗角蛋白抗体阴性，为中胚层来源的成纤维细胞。结论:组织块法培养的细胞符合才龈成纤维细胞的形态学和免疫学特征，可作为体外细胞模型，为研究细胞因子対英功能的调控作用奠定基础。［关键词］牙龈成纤维细胞;细胞培养;鉴定［中图分类号］R329.2+8
2、［文献标识码］A［文章编号］1673-7210（2010）01（c）-026-02TheprimarycultureandidentificationofhumangingivalfibroblastsCUIJuanl,SUNKeqinl,LIXial,ZHANGHuaping2（1.OralMedicineDepartmentofOralHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;2.CentralLaboratoryofOralHospitalofShanxi
3、MedicalUniversity,Taiyuan030001,China）［Abstract］Objective:Toisolateandculturehumangingivalfibroblasts（HGFs）invitro,andprovidetheexperimentalconditionforfurtherresearchontheHGFsregulationbycytokincs.Methods:HGFswereprimaryculturedbytissueexplantculturetechniqueandide
4、ntifiedbymorphologicalanalysisandimmunocytochemicalanalysis.Results:TheHGFswerecultui'edandpassagedsuccessfully.Thecellsshowedlongspindieorstarappearance.Byimmunocytochemicalanalysis,thesecellstestedpositivetoanti-vimentinantibodyandnegativetoanti-keratinantibody,in
5、dicatingthecellsweremesodermderivedfibroblasts.Conelusion:ThecellsculturedbytissueexplantculturetechniqueareconsistentwithtypicalHGFs'characteristicsofmorphologyandimmunocytochemicalobservation.TheHGFsareusedascel1modelinvitroforfutureresearchonHGFsregulationbycytok
6、ines.［Keywords］Gingivalfibroblasts;Cellculture;Identification人牙龈成纤维细胞（humangingivalfibroblasts,HGFs）是牙龈结缔组织屮的主体细胞,在牙周组织的保护和修复中起重要作用［1］。许多学者利用牙龈成纤维细胞体外培养模型，在牙周纽织发病机制及治疗方面进行了有益的探索［2］。原代培养是获取牙龈成纤维细胞的主要手段，目而有酶消化法和组织块培养法［3］。木实验采用组织块法培养人牙龈成纤维细胞，为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验
7、条件。1材料与方法1.1主要试剂和仪器DMEM培养液（Gibco,美国）；胎牛血清（四季青，杭州）；胰蛋白酶（Sigma,美国）；抗波形丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体、免疫纽■化试剂盒、DAB显色试剂盒（中杉金桥，北京）；25ml槊料培养瓶、六孔板（Orangescientific,比利时）;RC03000-7C02培养箱（REVCO,美国）;GB-II超净工作台（北京市新技术应用研究所）；倒置显微镜（重庆光学仪器厂）O1.2实验方法1.2.1纽织來源牙龈组织取材于山西庾科大学口腔医院口外科门诊因正畸盂拔牙或者因手术盂切除牙龈且牙龈
8、无炎症的患者，征得其同意后切取牙龈组织，患者年龄12〜26岁。1.2.2组织块法培养及传代新鲜切取的牙龈组织立即投入预冷含双抗的DMEM培养液中（含青得素100U/ml,链猎素100ug/ml）,在超净工作台屮用5倍抗生素溶液浸泡消毒，在无菌培养皿屮用眼科剪将牙龈纟fl织剪成
