原代培养中成纤维细胞的抑制

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1、成纤维型细胞：在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵园形核，胞质向外伸出2-3厘米个长短不同的突起，除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。培养细胞的纯化【我是小米2】培养细胞的纯化：1、自然纯化即利用某一种类细胞的增殖优势，而排挤其他细胞生长，靠自然的增值潜力最后留下生长优势细胞，去除其他细胞。有些恶性肿瘤细胞可以通过此方法，自然纯化建立细胞系。2、人工纯化（1）酶消化法在消化培养细胞时，常是成纤维细胞先脱壁

2、，而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，特别是在原代培养和培养早期这种差别尤为明显，因而可以利用这种差异采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开。（2）机械划除法原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞所数都同时出现，混杂生长。这种混杂生长常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。因此可以采用机械的方法去除不需要的细胞。（3）反复贴壁法成纤维细胞与上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞常能在短时间内大约10－30min完成附着过程，而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。（4）克隆法采用细

3、胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。（5）培养及限定方法某些细胞在生长过程中必须存在或必须去除某种物质，否则无法生长，可以利用这种技术来纯化细胞。（6）流式分选brdu【sxtyzyq2】除了Brdu能用于抑制成纤维细胞的生长，便宜易买到的【snany】阿糖孢苷效果不是特别理想【cl1202】我在SD大鼠胃粘膜壁细胞原代培养的文献中看到的：成纤维细胞大量生长是壁细胞分离培养失败的常见原因。培养基中加入血清会刺激成纤维细胞而抑制壁细胞生长，对壁细胞可能还有一定的毒性作用。为了减少成纤维细胞的生长，先加入含有胎牛血清（100ml/L）

4、的培养液，时差贴壁30-45分钟，除去成纤维细胞，然后再换用无血清的培养液进行培养。不知道你有没有用？试试吧。【sxtyzyq2】买sigma公司的brdu然后把它配成终浓度为1mmol/l然后1ml培养液中加入5微升就可抑制成纤维细胞【gfeng8078】我是养心肌原代，也需要抑制成纤维细胞，请问各位大侠，5-brdu用多大的浓度？【cheerfulness】养心肌原代最初24h培养液中加入终浓度为0.1mmol/L的brdu【gfeng8078】你是怎么样达到0.1mmol/L的浓度呀，由于有培养液的存在，加了Brdu进去，自然就稀释了？我想把Brdu溶解于

5、DMEM中然后一起抽滤，可是有报道说这对Brdu的药效有影响【jiangbin1230】请问用组织块贴壁法能培养出肠的成纤维细胞吗？我试过很多次了，一个皿就只有零散的一二十个成纤维细胞，都是柱状上皮细胞，是否由于正常组织太少不能培养出啊？能帮帮忙吗？【sdf771214】请问成纤维细胞的帖壁时间一般是多少?我养的是内皮细胞,如何时差帖壁啊?【victoh】不同来源的成纤维细胞在不同培养支撑介质上的贴壁时间应该是不一样的，此外也还受到其他一些因素的影响，至于上皮细胞，其本身种类就更加复杂了上皮细胞【warmbull】我现在正在做的培养，但发现有几瓶细胞可能是被成纤

6、维细胞（长梭形、透明细胞）污染了，后来成纤维细胞抑制了色素上皮细胞的生长。现在又出现了这种情况，请问各位大侠，有什么办法可以除去杂细胞？还有，我养的色素上皮细胞生长增殖很缓慢，有的甚至慢慢萎缩，会是什么原因呢？【叶知秋】上皮细胞传代次数多后，其形态就类似成纤维细胞，你也可以爬片作细胞鉴定，了解有无污染情况。生长缓慢除提高血清浓度外，还可以增加换液次数，及时分瓶传代。【yhdy2001】你可以试着用高糖培养基，这样细胞增殖快，目前国外和国内较大的细胞研究所普遍采用高糖培养基；另外，做原代时取材很关键，尽量避免筋膜等组织的污染【pigpig】曾经看过一篇论著，具体名

7、字记不清了，里面从分子和蛋白水平论证了视网膜色素上皮细胞传代4代以后基本没有RPE原有性质特征，只具有成纤维细胞的特征。【qkk1229】同意N代后就是成纤维细胞的模样，很多细胞体外培养到后来，都长的象成纤维细胞，不知道为什么，有人知道吗？【jamesxia】去除成纤维细胞1、反复贴壁法（差速贴壁法）：倒去旧培养液，用Hank′s液洗3次，然后加入消化液（0.2%EDTA+0.25%胰蛋白酶），37℃10min，镜下可见成纤维细胞成圆形，癌细胞维持原状。吸出消化液，加Hank′s液吹打细胞使成纤维细胞脱落，吸出旧液，组织块和癌细胞团用Hank′s液轻轻漂洗3次。

8、加入培养液CO2孵箱，3