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1、临床医学论文•格列酮对内皮祖细胞增殖、黏附及迁移能力的影响【摘要】目的:观察罗格列酮(rosiglitazone,Ros)对体外培养内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法:以密度梯度离心法获取脐血单个核细胞，培养7d后收集贴壁细胞并分为正常对照组、单独Ros(lumol/L、5umol/L及10nmol/L)组、H202(500卩mol/L)氧化应激模型组、Ros(1umol/L>5umol/L及10umol/L)和H202共同干预组，培养24ho用流式细胞仪检测细胞表达CD34、CD133、VEGFR-2、VE-Ca
2、dherin并用荧光显微镜观察细胞吞噬DiI-ac-LDL和FITC・UEA・1来鉴定EPCs。分别用CCK-8>普通光学倒置显微镜、改良的Boyden小室检测EPCs的増殖、黏附和迁移能力。结果：与正常对照组相比，单独Ros干预组呈浓度依赖性促进脐血来源的EPCs增殖、黏附及迁移能力(均P<0.05),但是Ros5mmol/L和lOumol/L组间没有显着弟异(P>0.05)；与H2O2氧化应激损伤组相比，Ros能呈浓度依赖性改善H202对EPCs增悄、黏附及迁移功能的抑制(均P<0.05),Ros5卩mol/L和lOumol/LT*预保护组之间没冇显着差异(均P>0.05)。结论:曝
3、呼烷二酮(TZDs)类药物Ros除具冇激动PPAR-Y受体降糖作用外，还具冇抗氧化应激损伤作用。Ros能促进EPCs功能，改善H2O2致EPCs功能的氧化应激损伤。【关键词】罗格列酮内皮祖细胞过氧化氢氧化应激Abstract:Objective:Tostudytheeffectofrosiglitazoneontheabi1ityofproliferation,conglutinationandtransfereofendothelialprogenitorcellinvitro.Methods:Totalmononuclearcellswereisolatedfromtheumbi1i
4、calcordbloodwithficol1densitygradientcentrifugation,afterthered内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)被认为是表达CD34/CD133/VEGFR-2的一群细胞，可以分化为内皮细胞，参与成体血管新生，同成熟内皮细胞相比具冇迟发性的高增殖性。EPCs具冇干/祖细胞增殖分化的特性，大量的动物实验和一些临床研究证明，EPCs是治疗缺血性疾病和修复血管内皮的良好种子细胞，具有口大的临床应用潜能。越來越多的研究结果揭示，心血管危险因素如高血压、糖尿病、高血脂、年龄、吸烟都会抑制EPCs的功能，促进细
5、胞衰老和凋亡[1,2],EPCs的数量和功能可作为心血管疾病危险程度新的预测因子。近年来我国的糖尿病发病率明显上升，糖丿永病被认为是冠心病的等危症，糖尿病患者10年心脑血管疾病发病率大于20%o烷二酮(TZDs)Ros是选择性激活过氧化物酶体增殖激活受体Y(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-Y,PPAR-Y)激活剂，是治疗糖床病的常用药。最近研究发现，TZDs类药物具有抗炎、抗免疫、保护血管内皮、抗动脉粥样硬化、降血压等脑岛索增敏效果的外作用[3-5]o本实验旨在观察Ros在体外正常培养和H2O2氧化应激损伤模型下对EPCs功能的影响，为明
6、确Ros治疗糖尿病外的血管保护作用提供新的依据。1材料和方法1.1材料6%轻乙基淀粉(购自Sigma公司)，纤维连接蛋白(购自Roche公司),VEGF(购自PcprotcchEC公司),PE-CD34(购自Caltaglaboratories),FITC-VE-cadherin（购自Bendersystem公司）,PE-VEGF-2及FITC・AC133（购自R&DSystem）,胎牛血清>M199（购自GIBCO公司）,Dil-ac-LDL（购§Molecularprobe公司），FITC・UEA・1、Tosiglitazone（购自Sigma公司），改良的Boyden小室（江苏海门
7、麒麟医用仪器厂生产），CCK・8细胞计数试剂盒（购自H本株式会社同仁化学研究所），胃癌细胞株（SGC7901,中国科学院上海生科院细胞资源中心提供）。1.2EPCs培养及鉴定1.2.1人脐血培养EPCs：外周血采集于温州医学院第一附属医院分娩室（已获得知情同意）。参考文献[6],取健康孕妇分娩后脐血50ml,6%疑乙基淀粉沉淀红细胞，以密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，以5X106/cm2接种于包被有纤维连接蛋白的6孔培养板中，每孔
