格列酮对内皮祖细胞增殖、黏附及迁移能力的影响

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1、格列酮对内皮祖细胞增殖、黏附及迁移能力的影响【摘要】目的:观察罗格列酮(rosiglitazone，Ros)对体外培养内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法:以密度梯度离心法获取脐血单个核细胞，培养7d后收集贴壁细胞并分为正常对照组、单独Ros(1μmol/L、5μmol/L及10μmol/L)组、H2O2（500μmol/L）氧化应激模型组、Ros(1μmol/L、5μmol/L及10μmol/L)和H2O2共同干预组，培养24h。用流式细胞仪检测细胞表达CD34、

2、CD133、VEGFR-2、VE-Cadherin并用荧光显微镜观察细胞吞噬DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1来鉴定EPCs。分别用CCK-8、普通光学倒置显微镜、改良的Boyden小室检测EPCs的增殖、黏附和迁移能力。结果:与正常对照组相比，单独Ros干预组呈浓度依赖性促进脐血来源的EPCs增殖、黏附及迁移能力（均P<0.05），但是Ros5μmol/L和10μmol/L组间没有显著差异（P>0.05）；与H2O2氧化应激损伤组相比，Ros能呈浓度依赖性改善H2O2对EPCs增殖、黏附及迁移功能的抑制（均P<

3、;0.05），Ros5μmol/L和10μmol/L干预保护组之间没有显著差异（均P>0.05）。结论:噻唑烷二酮（TZDs）类药物Ros除具有激动PPAR-γ受体降糖作用外，还具有抗氧化应激损伤作用。Ros能促进EPCs功能，改善H2O2致EPCs功能的氧化应激损伤。【关键词】罗格列酮内皮祖细胞过氧化氢氧化应激Abstract:Objective:Tostudytheeffectofrosiglitazoneontheabilityofproliferation,conglutinationandtransfereofendot

4、helialprogenitorcellinvitro.Methods:Totalmononuclearcellstheumbilicalcordbloodeproliferator-activatedreceptor-γ，PPAR-γ）激活剂,是治疗糖尿病的常用药。最近研究发现，TZDs类药物具有抗炎、抗免疫、保护血管内皮、抗动脉粥样硬化、降血压等胰岛素增敏效果的外作用[3-5]。本实验旨在观察Ros在体外正常培养和H2O2氧化应激损伤模型下对EPCs功能的影响，为明确Ros治疗糖尿病外的血管保护作用提供新的依据。1材料和方法1.1材

5、料6%羟乙基淀粉（购自Sigma公司），纤维连接蛋白（购自Roche公司），VEGF（购自PeprotechEC公司），PE-CD34（购自Caltaglaboratories），FITC-VE-cadherin（购自Bendersystem公司），PE-VEGF-2及FITC-AC133（购自R＆DSystem），胎牛血清、M199（购自GIBCO公司），Dil-ac-LDL（购自Molecularprobe公司），FITC-UEA-1、rosiglitazone（购自Sigma公司），改良的Boyden小室(江苏海门麒麟医用仪器厂生

6、产)，CCK-8细胞计数试剂盒（购自日本株式会社同仁化学研究所），胃癌细胞株(SGC7901，中国科学院上海生科院细胞资源中心提供)。1.2EPCs培养及鉴定1.2.1人脐血培养EPCs：外周血采集于温州医学院第一附属医院分娩室（已获得知情同意）。参考2.3Ros对EPCs黏附能力的影响　由表1可知，与对照组相比，(5μmol/L、10μmol/L)Ros组能明显提高EPCs黏附能力(均P<0.01)，1μmol/LRos干预组无明显差异（P>0.05)；与H2O2组相比，Ros加H2O2干预组也呈浓度依赖性地保护EPCs的

7、氧化应激损伤，改善EPCs的粘附能力（P<0.05或P<0.01)。Ros5μmol/L组、Ros10μmol/L组和Ros5μmol/L加H2O2干预组、Ros10μmol/L加H2O2干预组，两组间均无显著性差异（均P>0.05)。2.4Ros对EPCs迁移能力的影响由表1可知，与对照组相比，(5μmol/L、10μmol/L)Ros干预组显著提高EPCs的迁移能力(均P<0.01)，1μmol/LRos干预组差异无显著性（P>0.05)；与H2O2组相比，(5μmol/L、10μmol/L)Ros加H

8、2O2共同干预组能保护EPCs的氧化应激损伤，改善EPCs迁移能力（P<0.01)。Ros5μmol/L组、Ros10μmol/L组和Ros5μmol/L加H2O2干预组、Ros10μmol/L加H2