酶促反应动力学实验.ppt

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1、酶促反应动力学实验实验目的通过完成一定的实验方案设计，以分析研究各种因素对酶促反应速率的影响，学习鉴定温度，抑制剂等影响酶促反应速率的方法和了解测定酶的Km值和Vmax值的方法。（一）温度对于唾液淀粉酶活性的影响1.实验原理•酶作为生物催化剂，在酶促反应开始时反应速率随温度升高而增快，达到最大反应速率时的温度称为某种酶的最适温度。达到最适温度后，随着温度的升高酶促反应速率下降。测定酶活性在最适温度下进行。本实验以唾液淀粉酶为例，利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在不同温度下的酶活性，并根据底物即淀粉水解的快

2、慢来判断酶活性的高低。•淀粉经淀粉酶水解为葡萄糖的不同阶段，与碘试试剂作用的颜色反应如下：淀粉（蓝色）---紫色糊精（紫色）---红色糊精（红色）---无色糊精（无色）---麦芽糖（无色）---葡萄糖（无色）2.实验步骤•首先按如图所示在1到6号试管中加入试剂3.实验结果记录试管1试管3试管5褪色时间s4.实验讨论实际意义:•探究温度对酶的影响可方便提高酶活性,延长酶活有效期.•生产或实验中可使酶处于最适条件下能提高产量和质量，也可阻止一些不利生产的酶的繁殖，而将条件提升到适合有益酶的条件，择优或者达到两个酶都有益的条件，起到协同作用，增加效益

3、。琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制一、实验原理抑制剂和底物的结构相似，结合部位相同。抑制效应与酶浓度有关，底物浓度不变时，酶活性的抑制程度随抑制剂浓度的增加而增加；抑制剂浓度不变时，酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝的褪色情况来判断。琥珀酸脱氢酶琥珀酸+甲烯蓝延胡索酸+甲烯白二.实验步骤•1、酶提取液的制备：取大鼠骨骼肌适量，用冷水洗3次，加入1/15mol/LpH7.4的磷酸缓冲液，在高速组织捣碎机中进行捣碎，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。•2、取试管5支，编号，再按图所示步骤操作

4、：酶提取液（ml）磷酸缓冲液（ml）0.2mol/L琥珀酸（ml）0.02mol/L琥珀酸（ml）0.2mol/L丙二酸溶液（ml）0.02mol/L丙二酸溶液（ml）甲基蓝（滴）石蜡（滴）褪色时间（分钟）试管111.50.5—__—35试管2110.5—0.5—35试管3110.5——0.535试管411—0.50.5—35试管511.5——0.5—35•3、各管均在最后加入琥珀酸,并立刻将各试管溶液混匀，沿试管壁加入液体石蜡，约0.5cm，各试管置于37°C的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录蓝色消退时间。四、实验

5、结果记录褪色时间（分钟）[I]/[S]试管1试管2试管3试管4试管5五、实验讨论实际意义:琥珀酸脱氢酶是唯一嵌入到线粒体内膜的酶，是线粒体内膜的一个重要部分，其它酶大多存在于线粒体的基质，作用于有氧呼吸过程。作为参与三羧酸循环的关键酶，琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶（markerenzyme）之一，其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标，对于评价精子线粒体功能、研究致奶牛酮缺乏症病理过程等具有重要意义。