实验五酶促反应动力学实验

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1、实验五酶促反应动力学实验【实验目的】1、了解温度对酶活性及酶促反应速度的彩响，加深对酶特性的认识。2、了解离子对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。【实验原理】1、每种酶都冇其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久丧失；而若处于极低温度的环境屮只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分的恢复其活性。2、酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；冇些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。C「是唾液淀粉酶的激活剂。其它的阴离子，如BrNO3•和I

2、•对该酶也有激活作用，但较微弱。而C产对唾液淀粉酶具有抑制作用。激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且常具有特异性。就木实验，低浓度C「可以增加酶活性，高浓度的C「或者低浓度的Cu2+则会抑制酶活性，同时低浓度的NaJSO?-等对酶活性没冇影响。激活剂的作用机制是多种多样的，可能是作为辅酶或辅基的一个组成部分，也可以直接作为酶活性中心的构成部分。【实验用品】1、仪器和器材：冰箱、恒温水浴锅、紫外分光光度计、试管和试管架、移液枪及枪头、胶头滴管、烧杯2、试剂:DPH6.8的缓冲液:量取15.45ml的0.2M磷酸氢二钠和4.55ml的柠檬酸混合

3、摇匀即可。2)0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液：0.5g可溶性淀粉和0.5g氯化钠,溶于100ml蒸憾水(需加热)。3)碘液4)1MHCI溶液5)1MNaOH溶液6)稀释100倍的唾液7)冰水浴8)1%NaCI溶液9)0.1%CuSO4溶液10)0.1%淀粉液【实验内容】（-）温度对酶活性的影响1.制管和预温：由于木实验对恒温反应要求较高，故每个温度梯度使用两支试管，分别标记为A管和B管，同时欲温底物与酶。A管加入PH6.8的缓冲液和0.5%淀粉液;B管使用移液枪加入稀释100倍的唾液，相对应的两支试管置于设定的温度下预温5mino取12支洁净试管

4、，参照下表加入试剂:管号1(0°C)2（室温）3(37°C)4(50°C)5(70°C)6（室温）APH6.8的缓冲液(ml)222222含NaCl的0.5%淀粉液(ml)22222用2ml的蒸馅水代替B稀释100倍的唾液（ml）111111*6号管为对照组（比色时作为0号管），置于室温，且淀粉液用蒸憾水代替2.混合A、B管：将1号A管试剂迅速加入温度对应的B管中（为了最大限度保证酶的量），此时为计时的起点（使用秒表），摇匀后放回对应温度继续水浴。注意：转移A管试剂前需将其摇匀。3•时间控制然后每隔lmin或2min（时间自定）按上步操作依次把2、

5、3、4、5、6号的A、B管混合，严格控制好时间。4.中止反应准确反应13min,向1号管加入2滴IMHC1溶液，立即混匀，中止反应，按上一步的顺序和吋间间隔依次对各管进行操作，并移至试管架。后再各用2滴IMNaOII溶液中和每管。5.显色在每管中各加入加10.03175g/L碘液并混匀，观察现象。6.比色若不同温度梯度间现象差别不明显，则进行比色，通过光密度值来比较。（二）离子对酶活性的影响取3支洁净的试管，编号后按下表操作:管号1231%NaCI(mL)10.1%CuSO4(mL)1蒸憾水（mL）10.1%淀粉液（mL）333100倍稀释唾液（m

6、L）11137°C恒温水浴15min,取出滴加碘液碘液222结果【结果处理】记录现象（或比较吸光度值），做岀合理分析。【注意事项】严格注意时间的控制及各物质的添加量。【思考题】1、如果某同学（没有严格按照教案步骤）做出的实验结果为唾液淀粉酶的最适温度为70度，请分析他得岀这样的结果的可能原因。2、为什么加入淀粉后有试管内颜色显现为红色？