培养基母液的配制方法.doc

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1、培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H

2、2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸。四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。表1MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量(mg)1NH4NO

3、31650165002KNO31900190003CaCl2·2H2O44044004MgSO4·7H2O37037005KH2PO41701700注意：(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。(2)

4、CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。2、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe）组成。微量元素用量较少，特别是CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用电光天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。表2  MS培养基微量Ⅰ的配制序号化合物名称培养基浓度（mg

5、/L）扩大100倍称量(mg)1MnSO4·4H2O22.322302ZnSO4·7H2O8.68603H3BO36.26204KI0.83835Na2MoO4·2H2O0.2525表3  MS培养基微量Ⅱ的配制序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大10000倍称量(mg)1CuSO4·5H2O0.0252502CoCl2·6H2O  0.025250 注意：使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母

6、液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解，定容至1L。配制培养基时，配制1L取此液10ml。表4MS铁盐母液的配制序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大100倍称量(mg)1Na2-EDTA37.337302FeSO4·7H2O27.82780 注意：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时

7、，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30min)，调pH值至5.5，室温放置冷却后，再冷藏。4、有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L，注意称量时用电子分析天平。配制培养基时，每配1L培养基取此液5ml。注意：由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法

8、是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。表5  MS培养基有机物质母液的制备序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大200倍称量(mg)1甘氨酸24002肌醇100200003盐酸硫胺素(VB1)0.51004盐酸吡哆素(VB6)0.51