PT APTT TT.ppt

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1、PT/APTT/TT血浆凝血酶原时间测定（ProthrombinTime，PT）【原理】在受检血浆中加入足量的凝血活酶和钙离子,测定血浆凝固所需的时间，即为血浆凝血酶原时间(PT)。本试验是外源性凝血系统常用的筛检试验。【材料】1．凝血仪、水浴箱，灭菌注射器，硅化试管或塑料试管，离心机，秒表。2．25mmol／L氯化钙凝血活酶试剂。3．正常人冻干混合血浆。4．109mmol／L枸橼酸钠溶液。【操作】试管法1．硅化试管或塑料管中加入109mmol／L枸橼酸钠溶液0.2ml，静脉采血1.8ml加入上管中，充分混匀，3000rpm离心10min，分离血浆。2．将氯化钙凝血活酶溶液、健康

2、人混合冻干血浆和待测血浆，置37℃水浴中预温5min。3．取试管1支，加入健康人混合冻干血浆0.1ml，37℃水浴预温30s，再加入预温的25mmol／L氯化钙凝血活酶溶液0.2ml，混匀，开动秒表计时。4．不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时，终止计时，记录所需时间。重复测定2～3次，取其平均值。5．同样方法测定待测血浆的凝血酶原时间(重复测定2～3次，取平均值)。【注意事项】1．所用试管必须洁净、干燥、无划痕。2．应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器皿采血。3．采血要顺利，抗凝要充分，采血后应仔细检查标本有无溶血、黄疽和凝血块，任何微小的凝块都会影响测定结果，

3、必须重新采血。4．采血后宜在1h内完成测定，4℃冰箱内保存不应超过4h。5．水浴温度要控制在(37．0±0．5)℃，温度过高或过低都可影响测定结果。6．红细胞比容(Hct)小于0.2或大于0.5时，抗凝剂的用量应做适当的调整。抗凝剂＝(100一Hct)X血(m1)X0．00185。(m1)7．由于每次使用的氯化钙凝血活酶活性不尽相同，测定的条件也有变动，故每次测定均需有正常对照。氯化钙凝血活酶必须注明国际敏感指数(ISI)。【参考值】目前PT报告方式有①以直接测定的时间(PT)报告；PT：11～13s(超过正常对照3s有意义)。②以PT比值(PTR)报告，PTR＝待测血浆PT／健

4、康人混合冻干血浆PT；PTR：0.85—1.15。③以国际标准化比值(INR)报告，INR＝PTRISI(ISI为氯化钙凝血活酶试剂国际敏感指数)；INR：0.8～1.5。由于前两者存在的偏差较大，对临床上指导口服抗凝药物治疗用量有一定危险性，以及在国内难以开展室间质量评定，因此，在报告PT、PTR时，一定要报告INR。【评价】试管法为测定血浆凝血酶原时间的手工方法之一，其准确度比仪器法差，但多次重复测定也可得到较准确的结果。仪器法测定由半自动或全自动血凝仪完成，全自动血凝仪的准确性和精密度高。不同仪器及试剂测定同一血浆，其PT也有一定差异，但INR应一致。活化部分凝血活酶时间测

5、定(APTT)【原理】在37℃条件下，用白陶土(激活剂)激活Ⅺ、Ⅻ因子，用脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板第3因子，测定乏血小板血浆加入Ca2+离子后凝固所需的时间即为APTT。该试验是内源性凝血系统灵敏和常用的筛检试验。【材料】1．血凝仪法、水浴箱、灭菌注射器、硅化玻璃试管或塑料管、离心机、秒表2．109mmol／L枸橼酸钠溶液。3．APTT试剂(含白陶土或鞣酸及脑磷脂)。4．25mmol／L氯化钙溶液。5．健康人混合冻干血浆【操作】试管法1．静脉采血1．8ml，加入含有109mmol／L枸橼酸钠溶液0.2ml的试管中，充分混匀，3000r／min离心10min，分离血浆。2．

6、试管中加入预温的健康人冻干血浆和APTT试剂各0.1ml，混匀，37℃水浴中预温3min并轻轻振摇。3．于上述试管中加入预温的25mmol／L氯化钙溶液0.1ml，混匀，并立即计时，置水浴中不断振摇。20s后，不时地缓慢倾斜试管，观察试管内液体的流动状态，当液体停止流动时停止计时，记录时间。4．用同样方法测定待检血浆的APTT值。【注意事项】1．采血要顺利，血液抗凝要充分，避免凝块产生。2．采血后应尽快检测，最迟不应超过2h。否则凝固时间有缩短的倾向。3．血液离心速度要达到3000r／min，时间为10min，尽可能除去血小板，离心后血浆血小板计数应<20X109／L。4．血浆加

7、APTT试剂后预温时间不应少于3min。5．待检标本检测前应先测定健康人混合血浆，如果其APTT在允许范围内方能测定待检标本。否则，应重新配制APTT试剂。6．活化剂因规格不一，其致活能力不同，因此参考值有差异。如果正常人混合冻干血浆APTT明显延长，则提示APTT试剂质量不佳。【参考值】试管法和仪器法的参考值无差别，一般在(37土3.3)s，超过正常对照10s以上有意义。【评价】APTT是一个十分灵敏而简便的试验，能检出因子Ⅷ<25％的轻型血友病，可代替普通试管法凝血时间或血浆