乳酸杆菌的提纯.pdf

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1、乳酸杆菌的分离纯化与保种一、实验目的：利用MSR培养基从海参养殖底泥中分离出乳酸杆菌，并对其进行筛选、分离纯化与保种。二、实验器材与药品：MSR培养基、酒精灯、接种环、涂布棒、保温箱、烧杯、锥形瓶、脱脂乳试管、显微镜、移液枪、试管3个、生理盐水三、实验步骤：（1）MSR培养基的配制：蛋白胨10g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏10g，葡萄糖20g，吐温801g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，醋酸钠·3H2O5g,MgSO4·7H2O0.2g,MnSO4·4H2O0.05g,蒸馏水1l将各成分溶于蒸馏水中，调节PH至6.2─6.6，在121℃灭菌15分钟。灭菌后PH应在6

2、.0─6.5。向每升培养基中加入15g琼脂即可制成MRS琼脂培养基。（2）倒平板。（3）取海水底泥，用无菌生理盐水冲洗底泥（1：10），静置一段时间（4）吸取0.2ml上清液用灭菌的涂布棒进行涂布。可涂布六个平板。（5）40℃培养48h，（6）选取乳酸菌典型菌落转致脱脂乳试管中，40℃培养8~24h若牛乳出现凝固，无气泡，显酸性，涂片镜检细胞杆状或链球状，则可将其连续传代3次，最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。（7）取菌液与甘油15:85比例，放入超低温冰箱中保种。四、实验结果：乳酸杆菌菌落的形态特征：边缘整齐光滑、颜色乳白、表面湿润、中央隆起、菌落较

3、小，呈圆形，直径为3.0mm左右。