DNA(质粒)-浓缩方法.pdf

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1、DNA（质粒）浓缩方法步骤：1.加入0.1倍体积的3M的醋酸钠（pH5.2）和0.7倍体积的异丙醇，室温10min;2.室温下高速离心10分钟，底部可见白色的DNA沉淀，弃去上清；3.加入1mL70%乙醇，高速离心5分钟，弃去上清；4.空气干燥20分钟，加入适量（50μl）EndofreeElutionBuffer重新溶解质粒DNA。注：沉淀DNA时，醋酸钠和异丙醇一定要用常温的,否则盐可能也被沉淀下来。如果提取的不是特别微量的样品,乙醇或异丙醇沉淀的时间最好不要太长,因为过长时间的沉淀会造成沉淀中的盐分升高,影响PCR和酶切.个人经验:a)genomicDNA:2V乙醇+0.1V3

2、MNaAc，室温10min；plasmid(碱裂解法)：2V乙醇/1V异丙醇，室温10min；b)低温有助于低丰度/小片段沉淀，因此可以据具体情况-20℃沉淀,但沉淀的时间最好不要太长，事实上长时间不会对沉淀量有质的改变，因此结合保证质量和提高效率两大原则,不要选择长时间沉淀；c)当室温静置片刻后离心，看不见沉淀，可以再移入-20℃处理的（质粒很大，可能不需要-20℃）。