质粒浓缩方法【汇总】.doc

《质粒浓缩方法【汇总】.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、分子克隆有详细的描述，具体步骤如下：1、估算含有质粒溶液的体积V，加入V/9体积的3MNaAc，（我喜欢在质粒溶液中再加入一定量的水，使得总体积大概在270ul左右，之后加30ulNaAc）使NaAc终浓度为0.3M。2、加入2倍体积冰冷无水乙醇，冰上孵育或-20度20min，3、最大速度离心10min，4、用75%乙醇洗涤2次（每次700ul即可），5、室温晾干，6、加入适当体积的水或TEbuffer溶解即可。质粒浓缩的办法总的来说是利用乙醇沉淀DNA的原理进行.首先你应当确定你提取的质粒量有多大，体积多少，

2、这样才好确定浓缩的优化策略，详细步骤介绍如下：1确定体积，一般需要加2.5倍原始DNA溶液体积的95％乙醇（如果你提的质粒纯度好的话，可以将乙醇在－20度冰箱预冷后加入效果更好），同时加入1/10倍原始DNA溶液体积的醋酸钠(3M,pH4.8),；2离心，以离心机最大速度（13000rpm以上）离心10分钟；3倒掉上清，用10ul枪头吸去离心管里剩余的水，但不要吸到DNA；4室温放置10～15分钟，直至DNA刚刚晾干，但又不能干透成白色不透明状；5用适量去离子水或TE溶解至你所需要的浓度。为了浓缩达到你所需要的

3、浓度，你应先对质粒定量，如果质粒总量小于2ug，在沉淀时可以加入1ul的糖原，以便于操作。biomiga-EndoFreeplasmidezFlowmaxikit(快速法）-内有质粒浓缩方法注：得到的DNA需要浓缩，请加入0.1倍体积的3M的醋酸钠（pH5.2）和0.7倍体积的异丙醇，室温10min，室温下高速离心10分钟，底部可见白色的DNA沉淀，弃去上清，加入1mL70%乙醇，高速离心5分钟，弃去上清，空气干燥20分钟，加入EndofreeElutionBuffer重新溶解质粒DNA。沉淀DNA时，醋酸钠和

4、异丙醇一定要用常温的否则盐可能也被沉淀下来。如果提取的不是特别微量的样品,乙醇或异丙醇沉淀的时间最好不要太长,因为过长时间的沉淀会造成沉淀中的盐分升高,影响PCR和酶切.因此我个人都是:genomicDNA:2V乙醇+0.1V3MNaAc,室温10min;plasmid(碱裂解法):2V乙醇/1V异丙醇,室温10min;RNA:1V异丙醇,室温5min(很多国外RNA相关实验的Kit专门说明了不要超过5min,否则有可能影响后续实验).低温有助于低丰度/小片段沉淀,因此可以据具体情况-20度沉淀,但沉淀的时间最

5、好不要太长,事实上长时间不会对沉淀量有质的改变,因此结合保证质量和提高效率两大原则,不要选择长时间沉淀.当室温静置片刻后离心，看不见沉淀，大可以再移入-20C处理的。