【生物工程专业】【毕业设计】灵菌红素合成酶基因的克隆

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1、（20届）毕业论文（设计）灵菌红素合成酶基因的克隆II摘要:灵菌红素(prodigiosins，PG)是一些放线菌、沙雷氏菌及其它细菌产生的具有重要生物活性的次级代谢产物。本研究通过PCR扩增、T-A克隆测序分析Serratiajx.1的功能基因pigC，与GenBank中其它物种相应基因核苷酸序列、氨基酸序列进行了比对分析，取得了一系列有价值的研究成果：pigC基因全序列长为2641b，与来源于Serratiamarcescens274菌株中pigC基因，在核苷酸水平上同源性高达98.9%，但氨基酸水平上的同源性达92.1%，并且建立了该蛋白系统进化树。另外

2、，将扩增的目的基因与pUCm-T载体连接重组转入E.coliTop10中，得到了稳定表达。关键词:灵菌红素；沙雷氏菌；PigC基因；PCR扩增；进化树IIAbstract:ProdigiosinisproducedbyanumberofActinomycetes,Serratiaandotherbacteriaassecondarymetaboliteswithimportantbiologicalactivities.ThePigCgenefromSerratiawasclonedbythePCRmethodandT-Amethod.ThenPigCgene

3、wassequencedandanalyzed,andblastnedwiththeotherspeciesintheGenBankatthenucleosideacidandaminoacidlevels.Thefollowingresultsareachieved:thelenghthofthePigCgeneinSerratiajx.1was2641bp.ThecomparisonofthesefragmentsequenceswiththoseofothersthroughblastnofGeneBank,theresultsindicatedthat

4、thehomologyrateofnucleosideacidarraysofthepigCwithSerratiamarcescens274are98.9％,whilethehomologyrateofAAarraysare92.1％.Andthephylogeneticevolutiontreeisconstructed.Inaddition,thePigCgenewasinsertedbetweentheBamH1和HindIII.ItwasconfirmedthatthePigCgenefromSerratiawasintegratedintothec

5、hromosomalDNAofT.reeseibythePCRtest.Keywords:prodigiosins;Serratia;PigC;PCR;phylogenetictreeII目录摘要:IAbstract.II1绪论11.1灵菌红素的基本性质11.2选题的背景及意义12方法与材料32.1实验材料32.1.2主要仪器与试剂32.1.3培养基32.2实验方法32.2.1培养32.2.2DNA的提取32.2.3PigC基因的克隆52.2.4大肠杆菌感受态的制备52.2.5目的基因与T-载体的连接62.2.6重组质粒的转化62.2.7转化子的蓝白筛选62.

6、2.8转化子的PCR验证62.2.9PigC基因的测序73结果与分析83.1粘质沙雷氏菌株DNA的提取83.2PigC基因的克隆PigC基因的扩增及序列分析83.3大肠杆菌感受态的制备103.4转化子的蓝白筛选113.5转化子的PCR验证113.6PigC基因的测序113.7系统进化树的建立133.8讨论144结论15参考文献16致谢181绪论1.1灵菌红素的基本性质灵菌红素（prodigiosins,PG)又名灵菌素、灵杆菌素，分子式为C20H25N30(M=323.1968)，是一类天然红色素的总称，通常都有3个吡咯环组成的甲氧基吡咯骨架结构，1929年由

7、Amak等研究Serratia生长时发现，包括prodigiosin，prodigiosin25-C，metacycloprodigiosi（nMP）desmethoxyprodigiosin和uncedylprodigiosin（UP）等，是由一些放线菌、沙雷氏菌及其它细菌产生的次级代谢产物[1,2]，灵菌红素通常呈暗红色，具有绿色反光，熔点151-152℃。在碱性或中性溶液中呈橙黄色，酸性溶液中呈红色。在甲醇溶液中，酸性条件下在540nm处有特征吸收，碱性条件下在466nm处有特征吸收。其为脂溶性色素，易溶于甲醇，氯仿，苯和丙酮，不溶于水。在极性较强的酸性

8、和碱性水溶液中微溶，在极性较弱的有机溶