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时间:2017-08-09
《【生物工程专业】【毕业设计+文献综述+开题报告】灵菌红素合成酶基因的克隆》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、(20届)毕业论文(设计)灵菌红素合成酶基因的克隆III摘要:灵菌红素(prodigiosins,PG)是一些放线菌、沙雷氏菌及其它细菌产生的具有重要生物活性的次级代谢产物。本研究通过PCR扩增、T-A克隆测序分析Serratiajx.1的功能基因pigC,与GenBank中其它物种相应基因核苷酸序列、氨基酸序列进行了比对分析,取得了一系列有价值的研究成果:pigC基因全序列长为2641b,与来源于Serratiamarcescens274菌株中pigC基因,在核苷酸水平上同源性高达98.9%,但氨基酸水平上的同源性达92.1%,并且建立了该蛋白系统进化树。另外,将扩增的目的基因与pU
2、Cm-T载体连接重组转入E.coliTop10中,得到了稳定表达。关键词:灵菌红素;沙雷氏菌;PigC基因;PCR扩增;进化树IIIAbstract:ProdigiosinisproducedbyanumberofActinomycetes,Serratiaandotherbacteriaassecondarymetaboliteswithimportantbiologicalactivities.ThePigCgenefromSerratiawasclonedbythePCRmethodandT-Amethod.ThenPigCgenewassequencedandanalyzed,
3、andblastnedwiththeotherspeciesintheGenBankatthenucleosideacidandaminoacidlevels.Thefollowingresultsareachieved:thelenghthofthePigCgeneinSerratiajx.1was2641bp.ThecomparisonofthesefragmentsequenceswiththoseofothersthroughblastnofGeneBank,theresultsindicatedthatthehomologyrateofnucleosideacidarrays
4、ofthepigCwithSerratiamarcescens274are98.9%,whilethehomologyrateofAAarraysare92.1%.Andthephylogeneticevolutiontreeisconstructed.Inaddition,thePigCgenewasinsertedbetweentheBamH1和HindIII.ItwasconfirmedthatthePigCgenefromSerratiawasintegratedintothechromosomalDNAofT.reeseibythePCRtest.Keywords:prodi
5、giosins;Serratia;PigC;PCR;phylogenetictreeIII目录摘要:IAbstract.II1绪论11.1灵菌红素的基本性质11.2选题的背景及意义12方法与材料32.1实验材料32.1.2主要仪器与试剂32.1.3培养基32.2实验方法32.2.1培养32.2.2DNA的提取32.2.3PigC基因的克隆52.2.4大肠杆菌感受态的制备52.2.5目的基因与T-载体的连接62.2.6重组质粒的转化62.2.7转化子的蓝白筛选62.2.8转化子的PCR验证62.2.9PigC基因的测序73结果与分析83.1粘质沙雷氏菌株DNA的提取83.2PigC基因的
6、克隆PigC基因的扩增及序列分析83.3大肠杆菌感受态的制备103.4转化子的蓝白筛选113.5转化子的PCR验证113.6PigC基因的测序113.7系统进化树的建立133.8讨论144结论15参考文献16致谢181绪论1.1灵菌红素的基本性质灵菌红素(prodigiosins,PG)又名灵菌素、灵杆菌素,分子式为C20H25N30(M=323.1968),是一类天然红色素的总称,通常都有3个吡咯环组成的甲氧基吡咯骨架结构,1929年由Amak等研究Serratia生长时发现,包括prodigiosin,prodigiosin25-C,metacycloprodigiosi(nMP)
7、desmethoxyprodigiosin和uncedylprodigiosin(UP)等,是由一些放线菌、沙雷氏菌及其它细菌产生的次级代谢产物[1,2],灵菌红素通常呈暗红色,具有绿色反光,熔点151-152℃。在碱性或中性溶液中呈橙黄色,酸性溶液中呈红色。在甲醇溶液中,酸性条件下在540nm处有特征吸收,碱性条件下在466nm处有特征吸收。其为脂溶性色素,易溶于甲醇,氯仿,苯和丙酮,不溶于水。在极性较强的酸性和碱性水溶液中微溶,在极性较弱的
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