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1、一二三四五nfpnJpw?nfprtf?实实实实实大肠杆菌生长曲线测定发酵工业分析实验口录样品中还原糖的测定（斐林试剂法）白酒中总酸的测定白酒中总酯的测定比重瓶、折光仪、旋光仪的使用实验一样品中还原糖的测定（斐林试剂法）（3学时）一、实验目的：掌握斐林试剂测定还原糖的方法。测定酿造酱油中述原糖的含量。二.实验原理斐林试剂由甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。混合吋，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO4=
2、Cu（OH）2++Na2SO4所牛成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，牛成酒石酸钾钠铜络合物，使氢氧化铜溶解：COOKICHOHCu(OH)2+
3、CHOHICOONaCOOKCu+2H2OCOONa酒石酸钾钠铜络合物中二价铜是一个氧化剂，能使还原糖中按基氧化，而二价铜被还原生成一价的氧化亚铜沉淀：COOK*2CuCOONacz°IXH(CHOH)4ch2oh+2H2oCOOKICHOHICHOHICOONaCOOHI(choh)4I.CH2OH+Cu?。+（红色）反应终点用次甲基蓝指示刘显示。因次甲基蓝氧
4、化能力较二价铜弱，故待F价铜全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点：(CHOH)4+
5、
6、+HoO=!il二;CH2OH(CH3)2N/^/XgZ>s/^N+(CH3)2-C1-次甲基直(蓝色厂fOOH/晟/、=(CHOH,+
7、+HCIch2oh(ch.3)2n/、/^^/'n(ch3)2三、试剂1菲林甲液称取分析纯硫酸铜(CuS04-5H20)15g及四甲基蓝(次甲基蓝)0.05g,用蒸憾水溶解，淀容至lOOOmLo2菲林乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠54
8、g及分析纯亚铁氧化钾4g,用蒸谓水溶解，定容至lOOOmLo30.1%葡萄糖标准溶液精确称取在105°C烘2〜3h至恒重的分析纯无水葡萄糖1.000g,放入lOOmL烧杯屮，用蒸帼水溶解,定容至lOOOmL,为防染菌，口J加5mL浓盐酸后再定容。四.测定步骤1.样品处理及吸取精确吸取样詁lOmL,用蒸憎水稀释定容至lOOmL,摇匀吸取稀释液lmL进行测定。稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。2菲林试剂的标定精确吸取费林卬、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中，加蒸纟留水10mLo再用滴定管加入0.1%葡萄糖
9、标准液9mL0摇匀在电炉上加热,使其在2min内沸腾，沸腾30s后，匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。3预备滴定精确吸取费林卬、乙液各5讥,放入150mL锥形瓶屮，加蒸傭水10讥,再加ImLlO%样品稀释液。根据样品含糖量的高低(估计数)，可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%葡萄糖液(空白滴定耗用葡萄糖液一般在10mL以上)，摇匀加热，沸腾30S后，匀速滴入0.1%葡萄糖液，至蓝色消失即为终点，记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液毫升数，作正式滴定
10、时参考用。4正式滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内，加蒸纟留水10mL及ImLlO%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少0.5mL左右的0.1%葡萄糖标准液，摇匀后加热，使其在1〜2min内沸腾，沸腾30S后匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液的毫升数(B)o做平行测定，两次相差不得超过0.ImLo1.3计算(A-B)XC还原糖(以葡萄糖计,g/100mL或g)=X100(1)V式中：A——菲林试剂标定耗用0.1%葡萄糖
11、标准液数，mL;B——正式滴定耗用0.1%葡萄糖标准液数，mL;C——ImLO.1%葡萄糖标准液含葡萄量(即0.001g);V——吸取样液相当样品量,mL注意事项1每批试样测试両必须做空口滴定,二次平行测定误弟不得超过0.ImLo2空白滴定、预备滴定及正式滴定操作条件应保持一致。滴定速度应以每秒1〜2滴为宜。热源要稳定,在正式滴定时，待试样沸腾后,标准糖液的滴定量必须控制在0.5〜ImL之内，否则要重做。整个滴定过程必须始终保持沸腾状态。3凡样品含糖量在6%以上时，应适当增加稀释倍数，否则会加大误差。4
12、酿造酱油在制品常含有非糖还原物质，所以木法测定结果略为偏高。实验二白酒中总酸的测定（3学时）一.原理白酒屮总酸以小和法直接测定。挥发酸用水蒸汽蒸镭，镭出液以屮和法测定,总酸和挥发酸之差即为非挥发酸。二.试剂1）0.□氢氧化钠溶液2）0.5%酚駄指示剂三•测定步骤总酸的测定：吸取50毫升白酒，置入500毫升三角瓶中，加100毫升水和2滴0.5%酸駄指示剂，用0・1N氢氧化钠溶液滴定至微红色。总酸（以乙酸计克/10（）毫升）=（NV）讪x0.0
