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1、发酵工业分析实验目录实验一样品中还原糖的测定（斐林试剂法）实验二白酒中总酸的测定实验三白酒中总酯的测定实验四比重瓶、折光仪、旋光仪的使用实验五大肠杆菌生长曲线测定实验一样品中还原糖的测定（斐林试剂法）（3学时）一、实验目的：掌握斐林试剂测定还原糖的方法。测定酿造酱油中还原糖的含量。二．实验原理斐林试剂由甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，生成酒石
2、酸钾钠铜络合物，使氢氧化铜溶解：酒石酸钾钠铜络合物中二价铜是一个氧化剂，能使还原糖中羰基氧化，而二价铜被还原生成一价的氧化亚铜沉淀：反应终点用次甲基蓝指示刘显示。因次甲基蓝氧化能力较二价铜弱，故待二价铜全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点：三、试剂1菲林甲液称取分析纯硫酸铜(CuSO4·5H2O)15g及四甲基蓝(次甲基蓝)0.05g,用蒸馏水溶解,淀容至1000mL。2菲林乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚铁氰化钾4g,用蒸馏水溶解,定容至10
3、00mL。30.1%葡萄糖标准溶液精确称取在105℃烘2～3h至恒重的分析纯无水葡萄糖1.000g,放入100mL烧杯中,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,为防染菌,可加5mL浓盐酸后再定容。四．测定步骤1.样品处理及吸取精确吸取样品10mL,用蒸馏水稀释定容至100mL,摇匀吸取稀释液1mL进行测定。稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。2菲林试剂的标定精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。再用滴定管加入0.1%葡萄糖标准液9mL。摇匀在电炉上加热,使其在2min内沸腾,沸腾
4、30s后,匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。3预备滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。根据样品含糖量的高低(估计数),可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%葡萄糖液(空白滴定耗用葡萄糖液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入0.1%葡萄糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液毫升数,作正式滴定时参考用。4正式滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入1
5、50mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少0.5mL左右的0.1%葡萄糖标准液,摇匀后加热,使其在1～2min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液的毫升数(B)。做平行测定,两次相差不得超过0.1mL。1.3计算(A-B)×C还原糖(以葡萄糖计,g/100mL或g)＝─────×100…………………(1)V式中:A——菲林试剂标定耗用0.1%葡萄糖标准液数,mL;B——正式滴定耗用0
6、.1%葡萄糖标准液数,mL;C——1mL0.1%葡萄糖标准液含葡萄量(即0.001g);V——吸取样液相当样品量,mL注意事项1每批试样测试前必须做空白滴定,二次平行测定误差不得超过0.1mL。2空白滴定、预备滴定及正式滴定操作条件应保持一致。滴定速度应以每秒1～2滴为宜。热源要稳定,在正式滴定时,待试样沸腾后,标准糖液的滴定量必须控制在0.5～1mL之内,否则要重做。整个滴定过程必须始终保持沸腾状态。3凡样品含糖量在6%以上时,应适当增加稀释倍数,否则会加大误差。4酿造酱油在制品常含有非糖还原物质,所以
7、本法测定结果略为偏高。实验二白酒中总酸的测定（3学时）一．原理白酒中总酸以中和法直接测定。挥发酸用水蒸汽蒸馏，馏出液以中和法测定，总酸和挥发酸之差即为非挥发酸。二．试剂1)0.1N氢氧化钠溶液2)0.5％酚酞指示剂三．测定步骤总酸的测定：吸取50毫升白酒，置入500毫升三角瓶中，加100毫升水和2滴0．5％酸酞指示剂，用0．1N氢氧化钠溶液滴定至微红色。式中N、V——氢氧化钠溶液的当量浓度与消耗体积（毫升）0.06006——乙酸的毫克当量（克）50——吸取酒样体积（毫升）100——换算成100毫升酒样中酸
8、量若以乳酸计，只需将乙酸的毫克当置换成乳酸的毫克当量（0．09008）即可。实验三白酒中总酯的测定（3学时）酯为有机酸与醇类在酸性条件下经酯化作用而成。酒中香味在很大程度上与酯类的组成及含量有关，它是酒的一个很重要的质量指标。白酒中酯类成分极为复杂，其中有乙酸乙酸、已酸乙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯等。用化学分析法测得的为总酯，常以乙酸乙醋计算。一、原理二、白酒中总酯的测定是先用碱中和游离酸。再加入一定量的碱使酯皂化，过量的碱用酸滴
