组胺产生菌的筛选及鉴定【开题报告】

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1、毕业论文开题报告生物工程组胺产生菌的筛选及鉴定一、选题的背景与意义组胺（histamine）为一种生物胺，可在许多动、植物中发现。由于它是由微生物作用于其前体—-纟fl胺酸而产生的，普遍认为食物屮存在着纟fl胺⑴。比如水产品屮最具毒性的生物胺是纽•胺，组胺通过与细胞膜上的两类受体（Ill和112）作用而发挥毒性。在鱼体中游离纽•氨酸在纽胺酸脱竣酶催化下，发生脱竣反应形成组胺。当机体摄入组胺超过lOOmg时，即可引起过敏性食物中毒⑵。鳍科鱼类体内含有较多游离的组氨酸，含量随鱼种类的不同而变化。如金枪鱼约为15g/kg,而稣鱼则仅为lg/kgo组胺是海洋鮪科鱼类中含虽最多和最主要的生物胺，因

2、此组胺含虽常被作为检测这类水产品腐烂变质程度的指标。纽胺屈于单胺类神经递质,参与多种牛理病理活动过程，如对睡眠、摄食、休温、精神情感性疾病的调节⑶。组胺本身乂有强大和广泛的药理作用，主要影响血管、平滑肌和腺体的功能⑷。①对血管的作用：组胺可便小动脉、毛细血管和小静脉扩张，使循环血量相对减少，以及毛细血管通透性增加②对平滑肌的作用：组胺使支气管平滑肌痉挛，引起呼吸困难。③对胃液分泌作用：组胺对胃液分泌具有高度选择性，在尚不致使血压卜•降的小剂量时即能显著促进其分泌。纽胺是I型变态反应（变态反应性疾病发病率约占全球人口的30%40%,其对人类的危害极人）屮最重要的炎性介质,深入研究组胺，対食

3、物过敏的防治具有重要的意义⑸。组胺生成菌普遍存在于海水环境中，也生活在活鱼的鲤和内脏中⑹。当鱼体存活吋，该细菌不对鱼产生危害。一旦鱼死亡，鱼的防御系统就破坏,在适宜温度下，组胺菌就迅速生长并产生组胺。市售鱼类存在组胺安全隐患，在加工调理时温度控制不当，食用时就会引起纟fl胺的中毒现象发生。然而，虽有和关的卫生标准，但近年來鱼体中组胺含量超标而引起的中毒事件屡冇发生"闸。主耍原因是有些人对鱼类及海产品的可食性与组胺含量有关缺乏了解，不清楚组胺含量是评价血类及海产品腐败程度的重要指标。随着经济的繁荣、食品安全问题越来越受社会的关注，人们不仅仅局限丁吃饱，还要考虑吃的女全和营养，因此，通过对组

4、胺进行研究和认识可以捉高和改善食甜的质量及安全性。并且组胺原木就具有药理和毒理学作用，因此通过对组胺的研究可以更好的驾驭这种化学活性物质，使其弊端减为最小，使其益处为人所川，充分利用这种活性物质。二、研究的基木内容与拟解决的主要问题：1组胺产生菌的筛选。配制筛选产组胺的培养基，从鱼体中进行产组胺菌的分离筛选。2组胺产生菌的鉴定。进行产组胺菌的生理生化鉴定，及PCR鉴定。三、研究的方法与技术路线：研究方法1总菌数•各类菌的测定步骤1稀释1.1倒平板将VRBG琼脂培养基、PI琼脂培养基、TCBS琼脂培养基以及组氨菌选择培养基加热溶解，冷却至55-60WC时，分别到平板。1.2称取25g样品放

5、入盛有225mL稀禅液的无菌均质袋屮，用拍击式均质器拍打1min〜2min,制成1:10的样品匀液。1.31mb无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管屮（注意吸管或吸头尖端不要触及稀禅液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。1.4按1.3操作程序，制备10倍系列稀轻样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。1.5根据対样品污染状况的估计，选择2个〜3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时,吸取适量的匀液涂布到各平板小。每个稀释度做两个样，同时，分别吸取适量的空口稀释液涂布到各

6、平板中作为空白组。2培养各平板置于15°C±1°C的恒温箱屮培养7夭.(24°C,24h)3菌落计数参考国标4结果报告参考国标2组胺菌的二步筛选法实验步骤1稀释1.1倒平板将VRBG琼脂培养基、P1琼脂培养基、TCBS琼脂培养基以及纽氨菌选择培养基加热溶解,冷却至55-60°C时，分别到平板。1.2称取25g样品放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min〜2min,制成1:10的样品匀液。1.31mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀解液的无菌试管屮（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换川1支无菌吸管反复吹打使

7、具混合均匀，制成1:100的样品匀液。1.4按1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次5L无菌吸管或吸头。1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个〜3个适宜稀禅度的样品匀液，在进行10倍递增稀禅时,吸取适量的匀液涂布到各平板屮。每个稀释度做两个样，同时，分别吸取适量的空白稀释液涂布到各平板中作为空白组。2培养各平板置于35°C±1°C的恒温箱中培养24h.3纯化观察菌落特性，并记录，同时依据其特性，随机选