费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【开题报告】

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1、毕业论文开题报告食品质量与安全费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究一、选题的背景与意义费菜俗称“土人参”，又名土三七、救心菜，属景天科多年生草本植物。费菜主要分布于我国长江以南各地，不论在平原、丘陵地带还是高原山区费菜均能生长。它含有齐墩果酸、谷甾醇、生物碱、景天庚糖、黄酮类、有机酸、维生素E等多种成份，费菜中的这些成份使得它具有抑菌、抗氧化、增强免疫、扩张脑血管、改善冠状动脉循环等途径，达到降血压、防中风、防心脏病降血脂、抗肿瘤等功效，有很高的食用价值和医疗保健功能。随着人们对生活水平的不断提高，对身体保健也越来越重视，近年来世界上掀起了植物药及保健品的开发

2、热潮。通过对费菜提取液抑菌和抗氧化效果的研究，可以提高费菜的使用价值，有助于生产出具有治疗和预防多种疾病的药品和天然保健品，为费菜的综合利用开辟新途径，创造更大的社会效益和经济效益。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：基本内容1.研究费菜提取液对大肠杆菌的抑制效果2.研究金黄色葡萄球菌的抑制效果3.研究枯草芽孢杆菌的抑制效果4.测提取液中总黄酮的浓度5.研究费菜提取液还原力的测定6.研究费菜提取液对羟自由基的清除能力7.研究对DPPH·自由基的清除率三、研究的方法与技术路线：1.费菜提取液制取取新鲜费菜叶在70℃烘干24h，然后用药物粉碎机粉粉碎并过8

3、0目筛，得到的叶粉备用，在提取之前将叶粉在105℃烘干2h左右。称取5g干粉，置于150ml锥形瓶中，按照料液比1:50加入浓度为70%的乙醇，超声提取50min，60℃水浴浸提6h，趁热抽滤，得到滤液。将粗提液用旋转蒸发仪在45-50℃下浓缩至适量后，加入3-4倍体积的95％乙醇以沉淀多糖6h以上，再将粗提液用旋转蒸发仪在45-50℃下浓缩至适量，备用。2.抑菌圈法测定抑菌效果提前3天把大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌进行活化，接种斜面上备用。制备营养琼脂培养基,营养肉汤用于细菌的液体培养。把所要用的培养基、培养皿、移液枪头、无菌水等灭菌备用。首

4、先做每个菌不同梯度浓度的菌悬液。然后选择一种浓度的菌液用涂布的方法在培养皿中做好平板。用在酒精灯上烧过的6mm的打孔器在每个平板上打3个孔，正三角形均匀分散放置在平皿中央，每两个孔之间距离30mm以上，每个菌种做三组平行。并用灭菌的镊子夹掉打孔后的琼脂，分别取50μL的费菜提取液、硫酸庆大霉素和水注入3个孔内。硫酸庆大霉素做阳性对照，水做阴性对照。最后测每种菌菌落总数，基本保证做抑菌圈时各种菌的浓度一样（106-108个/ml）。暗室培养(细菌：37℃/24h)。测定抑菌圈直径，取平均值。3.费菜提取液最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度（MBC）的测定

5、采用二倍稀释法，以水为溶剂，配制一系列梯度浓度的费菜提取液溶液，将不同梯度浓度的费菜提取液溶液1ml加入到1ml已灭菌的液体培养基中，混合均匀，使培养基中费菜提取液的浓度分别为原提取液的1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，再在每管中加入0.1ml的菌液。暗室培养(细菌：37℃/24h)，每一与对照组（不加菌）比较，是否变浑浊，以不变浑浊管费菜提取液浓度为其最低抑菌浓度(MIC，minimuminhibitoryconcentration)。分别吸取1ml以上管中的液体到40度左右的营养琼脂培养基，测是否长菌。不长菌的最小费菜提取液浓度就

6、是MBC。4.测费菜提取液中总黄酮的浓度用芦丁做标准曲线，精密量取芦丁取液0．10mL、0．20mL、0．30mL、0．40mL、0．50mL、0．60mL，费菜提取液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2ml、2.5ml分置25mL量瓶中，各加水至6mL；分别加5%NaNO2溶液1mL，摇匀，放置6min；分别加10%Al(N03)3溶液1mL，摇匀，放置6min；然后分别加4%NaOH溶液1OmL，并分别加水至刻度，摇匀，静置15min，在510nm测定吸收度，以芦丁浓度(C)(mg／mL)对吸光度(A)作标准曲线，费菜提取液吸光度根据标准曲线算出浓

7、度。5.还原力测定取2．5mL不同浓度的费菜提取液于试管中，依次加人2．5mL0．2mol／LPBS(pH6．6)、5mL1％K3Fe(CN)6溶液，于5O℃保温20min后快速冷却，再加入2．5mL10％三氯乙酸溶液，3000r／min离心10min，取上清液2．5mL，依次加入2．5mL蒸馏水、0．5mL0．1％FeC1，溶液，充分混匀，静置10min，测定吸光值（以蒸馏水为参比溶液)，吸光度值越高还原力越强，作成曲线。6.羟自由基清除率测定按照Smirnof(1989)的方法，利用H2O2与FeSO4混合产生(·OH)，在体系内加入水杨酸捕捉(·O

8、H)并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收。于10mL容量瓶中依次加入2