三疣梭子蟹蜕皮抑制激素基因的组织表达【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）三疣梭子蟹蜕皮抑制激素基因的组织表达11目　录1引言32材料与方法42.1实验材料42.2实验试剂和引物42.3主要仪器42.4总RNA的提取42.5第一链cDNA合成52.6荧光定量PCR52.7相对定量处理63结果与分析63.1实验结果63.1.1获得总RNA结果63.1.2荧光定量PCR处理结果73.1.3相对定量法处理结果83.2讨论104展望12致谢12参考文献1311摘要：甲壳动物的蜕皮过程主要是由两种激素相互拮抗而进行调控的，分别是由Y器分泌的蜕皮类固醇激素和由X器-窦腺复合体分泌的蜕皮抑制激素（MIH），其中M

2、IH抑制Y器中蜕皮激素的合成从而抑制蜕皮。MIH是其中一个重要激素，和血糖过多激素（CHH）、性腺抑制激素（GIH）组成了一个新的甲壳动物的神经肽家族，本文通过荧光定量PCR对三疣梭子蟹MIH基因的组织表达进行研究，然后用相对定量法进行分析，结果发现MIH在X器-窦腺复合体、胸腹神经节、精巢、卵巢、肠、脑、Y器中都能表达，但是和X器-窦腺复合体相比，其他组织MIH的表达量极低。。关键词：三疣梭子蟹；蜕皮抑制激素；甲壳动物；X器-窦腺复合体。Abstract：Theprocessofecdysisofcrustaceansisanantagonistic

3、interactionbytwohormone.TheywereecdysoneoriginatesfromtheY-organandthemoltinginhibitionhormone(MIH)originatesfromX-organ/sinusgland(XO/SG)complex,respectively.AmongthemMIHinhibitsthesynthesisofecdysteroidsbyY-organs.MIHisanimportanthormone,togetherwithcrustaceanhyperglycemichorm

4、one(CHH)andgonadinhibitinghormone(GIH),theyconstituteanovelfamilyofrelatedpeptides.Thisarticleistostudythetissueexpressionofmolt-inhibitinghormonegenefromPortunustrituberculatusthroughfluorescencequantitativePCR,usingtheComparativeDelta-deltaCttoanalysisit.Asaresult,itfoundthatM

5、IHcanexpressinallorgans,likeX-organ/sinusgland,thoracicganglia,ovary,testis,gut,brain,Y-organ.However,comparingtoX-organ/sinusgland,theexpressionlevelinotherorgansisextremelylow.Keywords:Portunustrituberculatus；molt-inhibitinghormone；crustacean；X-OrganSinusGlandComplex。111引言三疣梭子

6、蟹（Portunustrituberculatus），属于甲壳纲梭子蟹科，是我国沿海地区的一种重要经济蟹类。因为它的生长迅速，再加上养殖利润丰厚，它已经渐渐成为中国沿海地区一种重要的养殖品种。三疣梭子蟹一般在3-5米深海底生活及繁殖，冬天它会移居到10-30米的深海中，它喜欢穴居在泥沙底部。近年来，随着各种虾蟹类在市场上需求的扩大和人们对虾蟹的过度捕捞，现有三疣梭子蟹的人工养殖也不能完全满足市场的需求。另一方面，人工养殖的三疣梭子蟹会出现抱卵过早[1]、蜕皮未遂[2]等问题。这些问题增加了三疣梭子蟹的养殖风险，制约了三疣梭子蟹市场的扩大。在甲壳动物中，

7、因为实验仪器、技术的改进，对神经内分泌调控及其功能的研究越来越多，但是仍然不能有效的解决养殖中普遍存在的性早熟和蜕皮未遂等难题。进一步的研究发现，这些问题可能与甲壳动物的蜕皮机制密切相关。[2]所以研究清楚蜕皮机制对解决三疣梭子蟹存在的问题具有很重要的意义。Zelony通过研究发现了眼柄在蟹的蜕皮周期中发生作用，它可以使蜕皮间期缩短从而促进蜕皮，然后他们推测眼柄中肯定存在一种蜕皮抑制因子。在眼柄切除后，不仅仅使蜕皮周期缩短，同样产生了一些其他的生理生化反应，比如对生长和性腺发育产生影响。[17,18]所以我们可以推测在蟹的眼柄中肯定存在多种激素来调节它

8、的生理生化反应。眼柄中的X器、Y器、大颚器都可以分泌一定的激素来影响蟹的生长发育。由X器-窦腺