三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素浓度的变化【开题报告+文献综述+毕业设计】

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1、本科毕业论文系列开题报告生物技术三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素浓度的变化一、选题的背景与意义三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus），隶属于甲壳纲、十足目、梭子蟹科，是中国沿海的重要经济蟹类。其生长迅速，养殖利润丰厚，肉多，脂膏肥满，味鲜美，营养丰富。每百克蟹内含蛋白质14克、脂肪2.6克。鲜食以蒸食为主，还可盐渍加工“枪蟹”、蟹酱，蟹卵经漂洗晒干即成为“蟹籽”，均是海味品中之上品，已经成为中国沿海地区重要的养殖品种。梭子蟹一般在3-5米深海底生活及繁殖，冬天移居到10-30米的深海，喜在泥沙底部穴居。目前国内也有人对甲壳动物中有关蜕皮激素做了研究，

2、如叶海辉等采用组织切片和电镜技术，对锯缘青蟹大颚器、Y器的形态结构进行了观察，以及赵维信、陆剑峰对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)Y-器官在蜕皮周期中的超微结构，进而指出其对蜕皮过程的影响。国内很少有人研究三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus）的蜕皮周期，作为中国沿海重要的经济蟹类，刚蜕完壳的软壳蟹的体积比蜕壳前增加了30%-40%,其壳通过环境中的钙盐等不断硬化而恢复正常硬度，三疣梭子蟹的个体增长在外表上并不连续，而是呈阶梯形，每蜕一次皮，上一个台阶。由此可见，三疣梭子蟹的生长发育与蜕皮息息相关，促进蜕皮的发生，可促进其发育成熟

3、，提高产量。了解蜕皮发生的时间，周期的长短对促进沿海三疣梭子蟹养殖业的发展非常重要。Y器又称为蜕皮腺，与昆虫的前胸腺为同功器官。1953年Gabe首次描述了58种软甲亚纲(Mala—costraca)种类的Y器，而切甲亚纲(Entomostraca)种类没有Y器[1]。Y器分泌的蜕皮类固醇不具生物活性，只有进入血淋巴，在外周组织20-羟化酶的催化作用下才转化成具有生物活性的20-羟蜕皮酮。研究表明，20-羟蜕皮酮不仅参与甲壳动物的蜕皮活动和胚胎发育，而且参与了卵巢发育过程[2]。如日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)、中华绒螯蟹(Eriochei

4、rsinensis)、中国对虾(Penaeuschinensis)血淋巴中20-羟蜕皮酮的周期性变化均与卵巢发育相关联[3-6]。利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-MS/MS）法完成三疣梭子蟹蜕皮过程中血淋巴蜕皮激素浓度变化的测定，对所得数据进行统计学分析，为海洋甲壳动物蜕皮等生长发育过程的生理学研究提供参考。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究的基本内容：1、利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-MS/MS）法完成三疣梭子蟹蜕皮过程中血淋巴蜕皮激素浓度变化的测定。2、对所得数据进行统计学分析。拟解决的问题：三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素浓度的变化。三、研

5、究的方法与技术路线：研究方法1、实验材料：三疣梭子蟹在宁波宁海长街得水育苗场购得，雌雄各半。体宽在9-11cm之间，体重在45-65g之间，实验样本均为未经过生殖蜕皮的三疣梭子蟹。2、参照传统甲壳动物蜕皮阶段的划分，结合三疣梭子蟹类本身所独有的特点，以游泳足末节新旧表皮间距/旧表皮厚度的比值为主要依据，1）血淋巴蜕皮激素的提取：从蟹的游泳足基部抽取300μL血淋巴，加入含有1200μL乙腈和20μL100ng/mL内标的1.5mL离心管内，轻微涡旋震荡，8500r/min高速离心15min。而后吸取上清液1mL（勿将底部蛋白吸入）于灭菌1.5mL离心管中，做好标记。冰

6、箱下层-20℃保存一周以内。2）血淋巴蜕皮激素浓度的变化的测量：将上清液旋转蒸发，用0.2mL纯甲醇复溶，进行液质分析。根据样品中20-羟基蜕皮酮（20E）特征离子响应强度与内标物高油菜素内酯的特征离子响应强度比值，用加入内标的工作曲线法求得样品中20-羟基蜕皮酮的含量。3）绘制统计图表进行分析。技术路线高速离心于1.5mL离心管漩涡震荡内吸取上清液1ml冰箱下层-20℃保存将上清液旋转蒸发0.2mL纯甲醇复溶加入内标的工作曲线法求得样品中20-羟基蜕皮酮的含量8500r/min，15min于灭菌1.5mL离心管中血淋巴的提取不超过1周时间液质分析20-羟基蜕皮酮（2

7、0E）特征离子响应强度/内标物高油菜素内酯的特征离子响应强度绘制统计图表进行分析整理数据、表格，撰写论文四、研究的总体安排与进度2010.10毕业论文选题；2010.10-2010.11进行文献查阅和资料收集；2010.11-2010.12完成任务书、开题报告、综述，进行开题答辩；2011.1-2011.2完成两篇外文文献的翻译；2011.2-2011.4进行论文实验，然后再把实验的数据整理，完成毕业论文2011.5进行毕业答辩五、主要参考文献：[1]LachaiseF，LeRouxA，HubertM，eta1．Themoltingglandofcr