纽虫铁蛋白的原核表达和抗重金属研究【优秀毕业设计】

《纽虫铁蛋白的原核表达和抗重金属研究【优秀毕业设计】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、２０１１届宁波大学本科毕业论文―――纽虫铁蛋白的原核表达和抗重金属研究本科毕业设计（20__届）纽虫铁蛋白的原核表达和抗重金属研究12２０１１届宁波大学本科毕业论文―――纽虫铁蛋白的原核表达和抗重金属研究目录1引言12材料与方法22.1材料22.2试剂22.3仪器22.4Ferritin基因ORF序列的PCR扩增22.4.1引物设计22.4.2PCR扩增42.4.3对ORF的PCR产物回收纯化42.4.4感受态细胞的制备42.5PCR产物和质粒载体的双酶切52.5.1酶切产物的回收纯化52.5.2目的片段与质粒载

2、体的连接52.5.3连接产物转化DH5α感受态细胞52.5.4质粒的提取62.5.5重组质粒转化E.coliBL21（DE3）感受态细胞62.6原核表达62.6.1重组蛋白的诱导表达62.6.2诱导表达产物的SDS-PAGE电泳72.7　重组铁结合蛋白抗重金属活性检测82.7.1实验前期准备82.7.2菌的活化和诱导82.7.3涂板计数83结果93.1Ferritin基因ORF序列的PCR扩增93.2SDS-PAGE93.3重组铁结合蛋白抗重金属活性检测104讨论115小结12致谢13参考文献1412２０１１届宁

3、波大学本科毕业论文―――纽虫铁蛋白的原核表达和抗重金属研究摘要：根据已克隆得到的纽虫铁蛋白cDNA序列，设计原核表达引物，PCR扩增ORF片段。将PCR产物和表达载体（pET28a(+)）进行双酶切，连接并转化到EscherichcoliBL21(DE3)中。IPTG诱导重组蛋白的表达，并通过电泳检测表达的状况。用含有不同浓度重金属(Fe2+、Cr2+)的LB培养基培养含重组蛋白的菌株，根据细菌的生长状况，分析重组表达的铁蛋白对重金属的抗性。结果表明重组铁蛋白的表达提高了菌株对Fe2+、Cr2+重金属的抵抗能力。

4、由此我们认为铁蛋白有助于生物适应周围环境中重金属浓度的变化。本研究为进一步深入研究铁蛋白的功能和增加机体免疫力的作用机理奠定基础。关键词：纽虫；铁结合蛋白；原核表达；抗重金属Abstract：AccordingtocDNAsequenceofferritinfromNemerteanswhichhasbeenclonedpreviously,theexpressionprimersweredesignedandtheORFfragmentwasamplified.ThePCRproductsandexpressi

5、onvector(pET28a(+))weredigestedbyrestrictionenzymes,thenwereligatedandtransformedintoEscherich.coliBL21(DE3).AfterIPTGinduction,therecombinantproteinwasseparatedby15%SDS-PAGE.IPTGinducedbacteriawereculturedinLBbrothcontainingthedifferentconcentrationsofheavym

6、etals(Fe2+,Cr2+).Basedonthegrowthofbacteria,theresistanceofrecombinantproteinwithheavymetalwasanalyzed.TheresultsshowedthattheexpressionofrecombinantferritinincreasedresistantcapabilityontheheavymetalofFe2+,Cr2+.Thus,ferritinwillhelpbiologyforadaptingtothecon

7、centrationchangesofheavymetalsintheenvironment.Thisstudywillofferthefoundationforthefurtherstudiesonthebiologicalfunctionsandthemechanismofimmunityofferritin.Keywords:Nemerteans;Ferritin;Prokaryoticexpression;Resistancetoheavymetal121引言本实验室在浙江省东部奉化市湖头渡沿岸的虾塘中采

8、到了一种纽虫。根据形态学、组织学和18SrDNA序列分析研究确定该纽虫属于异纽目，纵沟虫科，枝吻纽虫属，且被定名为浙江枝吻纽虫[1]。纽虫有血管和肛门，在整个动物世界中，它首先出现了完整的消化系统，封闭式循环系统及有成对的肠盲囊和生殖腺的排列，开始有了分节的趋向，因此，在动物演化过程中纽虫是属于关键性的[2]。纽虫是一类生活在浅海潮间带的无脊椎动物，在世界各地都有分布。纽