凝溶胶蛋白对胃癌细胞的影响【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）凝溶胶蛋白对胃癌细胞的影响目录0引言11材料和方法21.1凝溶胶蛋白的Ni柱纯化21.2SDS-PAGE电泳分析纯化情况21.3培养基的配置31.3.1准备和安装过滤器31.3.2合成培养基的配制31.3.3小牛血清的处理41.3.4生长培养基的配制41.4细胞培养41.5MTT法测定凝溶胶蛋白对癌细胞的生长影响41.5.1MTT的配制41.5.2MTT染色与观察41.6细胞凋亡荧光Hoechst33342/PI双染42操作要点52.1细胞培养中要注意的事项52.2MTT法测吸光度5MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检53

2、实验结果和讨论53.1凝溶胶蛋白的纯化6凝溶胶蛋白纯化电泳图见图1，图中由左至右四个泳道标号为1、2、3、4、5、6，分别为标准电泳63.2MTT法测凝溶胶蛋白对胃癌细胞的影响63.2.1MTT法测得凝溶胶蛋白处理胃癌细胞原始数据63.2.2根据MTT法测得光照密度计算不同浓度凝溶胶蛋白溶液对胃癌细胞的抑制率73.3荧光染色法检测凋亡细胞的形态学变化8选取的加入20μg/ml凝溶胶蛋白溶液处理的胃癌细胞进行荧光染色实验，在荧光显微镜下可见，随着凝溶胶蛋白给药剂量的增加，呈亮蓝色细胞的比率逐渐增加，并呈剂量依赖关系，提示8致谢10参考文献11附录12摘要：凝溶胶蛋白(gels

3、olin)是凝溶胶蛋白超家族的成员之一，是一种重要的肌动蛋白结合蛋白，许多研究发现凝溶胶蛋白（gelsolin）在多种肿瘤中表达明显降低。本实验在培养的胃癌细胞中加入凝溶胶蛋白，通过MTT（3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐）比色法和荧光染色法观察凝溶胶蛋白对胃癌细胞的作用，探究加入凝溶胶蛋白的胃癌细胞生长是否受到了抑制。结果显示，与未加入凝溶胶蛋白培养的胃癌细胞相比，加入凝溶胶蛋白培养的胃癌细胞中出现凋亡期的细胞和已死亡的细胞，表明凝溶胶蛋白对胃癌细胞的生长起到了抑制作用，且加入凝溶胶蛋白的浓度越大，抑制作用越明显。关键词：凝溶胶蛋白；肌动蛋白结合蛋

4、白；肌动蛋白；MTT比色法；荧光染色Abstract：Gelsolinisoneofmembersofthegelsolinsuperfamilyandisanimportantactinbindingprotein.Manystudieshavefoundthatgelsolininavarietyoftumorswassignificantlyreduced.Inthisstudy,gastriccancercellsinculturebyaddinggelsolinwereobservedbyMTT（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-d

5、iphenyltetrazoliumbromide）assayandfluorescentstaining,andexploretheaddedgelsolinwhethergastriccancercellgrowthwasinhibited.Theresultsshowedthatcomparedtogastriccancercellswithoutgelsolin,culturedcancercellsbyaddinggelsolinappearedapoptosisanddeath,whichindicatingthatgelsolinongastriccancer

6、cellgrowthinhibitionplayed,andjoinedthehighertheconcentrationofgelsolin,themoreobviousinhibition.Keywords：Gelsolin;Actin-bindingprotein;Actin；MTTColorimetry;Fluorescencedyeing0引言凝溶胶蛋白是一种普遍存在且进化高度保守的肌动蛋白结合蛋白。细胞能在特定的时间、空间调节肌动蛋白的聚合-解聚过程。能与肌动蛋白结合兵调节其聚合-解聚作用的一类蛋白统称为肌动蛋白结合蛋白[1]。目前，在生物界里已经发现几十个种类

7、，凝溶胶蛋白是在其中探究的比较清楚的一个种类。且凝溶胶蛋白最早于1979年[2]在兔的肺巨噬细胞中发现，证实了凝溶胶蛋白能以钙以来的方式调节肌动蛋白重组的功能，因而将这个蛋白命名为凝溶胶蛋白[3]。之后，人们在血小板细胞中[4]和血清中[5]也发现了此类蛋白。凝溶胶蛋白是细胞骨架蛋白的重要组成成分之一，生物活性和功能多种多样，在诸如细胞运动型、细胞骨架结构动力学重排过程中的信号转导、细胞凋亡的控制，甚至是肿瘤发生过程的调节等方面都发挥着重要作用[6,7]。凝溶胶蛋白由3个或者6个同源的结构相似的片段组成[8]。目前