干酪乳杆菌胞壁蛋白酶水解酪蛋白产生功能因子研究【优秀毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）干酪乳杆菌胞壁蛋白酶水解酪蛋白产生功能因子研究目录0引言11材料与方法11.1材料与试剂11.2仪器与设备11.3试验方法11.3.1酪蛋白水解方法11.3.2SDS-PAGE检测21.3.3ACE抑制活性测定方法21.3.4O2.-自由基的清除能力测定方法32结果与分析32.1不同CEP对α-和β-酪蛋白酪蛋白的水解特性的影响32.2酪蛋白水解肽的抗ACE活性研究42.2.1α-酪蛋白最佳水解时间42.2.2α-酪蛋白最佳水解酶与底物比42.2.3β-酪蛋白最佳水解时间52.2.4β-酪蛋白最佳水解时间52.3酪蛋白水解肽的O2.-自由基的清除能力研究53结论与展

2、望63.1结论63.2展望6致谢6参考文献7附录9摘要：本文研究了干酪乳杆菌胞壁蛋白酶（Cellenvelopeproteinase）CEP-1与CEP-2在不同时间和底物水平条件下水解α-酪蛋白和β-酪蛋白产生肽的抗血管紧张素转换酶（Angiotensin-Iconvertingenzyme，ACE）与抗氧化活性。结果表明，CEP-1和CEP-2水解酪蛋白产物的抗ACE与抗氧化活性显著。CEP-2水解酪蛋白产物的活性较CEP-1水解酪蛋白产物强。产生最高ACE抑制活性的水解条件为：CEP-2水解α-酪蛋白，37℃,pH7.0,时间6h，E/S=1:10,ACE抑制活性为84.66%.在低浓

3、度范围内，β-酪蛋白水解产物的自由基清除能力较α-酪蛋白强。在抗ACE活性最强的条件下进行水解，CEP-2水解β-酪蛋白产生最佳O2.-自由基清除能力，其IC50为0.2138mg/mL，自由基清除率为19.65%.关键词：干酪乳杆菌；胞壁蛋白酶；酪蛋白水解物；抗ACE；抗氧化活性Abstract:Thecharactersofcell-enveloppeoteinasespecificityforcaseinwerestudiedinthispaper.Meanwhile,α-caseinandβ-caseinpeptideproducedbyCEP-1andCEP-2atdifferen

4、tlevelsoftimeandundertheconditionofthesubstratewerealsodetermined.Theresultsshowedthat,CEP-1andCEP-2anti-caseinhydrolysisproductsofACEandantioxidantactivitywassignificantly.TheactivityofcaseinhydrolysisproductshydrolysatedbyCEP-2wasstongerthanCEP-1.ThehighestACE-inhibitoryactivitywas84.66%ofhydroly

5、sateproducedbyα-caseinundertheconditionsof37℃,pH7.0,hydrolysated6handtheratioofCEP-2tosubstrate(E/S)was1:10.Inthelowrangeofconcentration,β-caseinhydrolysates’freeradicalscavengingabilitywasbetterthanα-casein’s.Atthesameconditions,thehydrolysateofβ-caseinproducedbyCEP-2hadthestrongscavengingactivity

6、onO2.-,theIC50was0.2138mg/mL.Keywords:Lactobacilluscasei;Cellenvelopeproteinase;Hydrolysateofcasein;ACE-inhibitory;Antioxidant150引言干酪乳杆菌是一类革兰氏染色呈阳性，发酵己糖，以乳酸为主要代谢终产物的兼性厌氧细菌的总称，主要包括乳杆菌属、乳球菌属、明串球菌属、双歧杆菌属、片球菌属和链球菌素。该类微生物很大一部分均应该用于干酪、酸牛奶、发酵稀奶油等发酵乳制品生产[1]。干酪乳杆菌胞壁蛋白酶（CEP）嵌于干酪乳杆菌细胞壁上，属于蛋白水解酶，在蛋白酶水解系统中处于非常重

7、要的地位，是水解乳蛋白的关键酶[2]。大部分干酪乳杆菌胞壁蛋白酶，属于丝氨酸蛋白酶家族。它能把乳蛋白水解成一系列的短肽，这些肽类释放到培养液中或再由寡肽转移系统(Opp)[3]，如二肽和三肽转运系统（DtpP和DtpT）运输至细胞内，再由胞内肽酶（包括肽链内切酶，氨肽酶，pro-特异性肽酶等）进一步将短肽水解为氨基酸或更小的肽类[4]。而这些肽类，对血管紧张素转移酶(ACE)具有抑制作用，从而达到降血压的效果