不同条件对胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影响

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1、第41卷第6期河南科技学院学报2013年12月V01．41NO．6JournalofHenanInstituteofScienceandTechnologyDec．2013doi：10．3969~．issn．1008—7516．2013．06．002不同条件对胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影响于传瑞，杜开书，吴菲，申文鹏，娄伟强，丁凯，李淑梅(河南科技学院，河南新乡453003)摘要：研究了不同温度和水解时间以及不同浓度的SDS对胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影响．结果表明：在酪蛋白浓度为4％、加酶量2500U／g、pH为7的条件下，选择温度为5O℃，水解时

2、间为80min，酪蛋白的水解效果较佳，水解度为7．30％；同等条件下向此体系加入适量的SDS后，使SDS终浓度为0．00128g／mL，水解度提高为l3．50％．关键词：酪蛋白；胰蛋白酶；SDS；水解度中图分类号：TS201文献标志码：A文章编号：1008—7516(2013)06—0006—03EfectofdifferentconditionsontrypsinhydrolysisofcaseinhydrolysisdegreeYuChuanrui，DuKaishu，WuFei，ShenWenpeng，LouWeiqiang，DingKai，Li

3、Shumei(HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China)Abstract：EfectsofdifferenttemperatureandtimeofhydrolysisanddifferentconcentrationsofSDStotrypsinhydrolysisofcaseinhydrolysisdegreewerestudiedinexperiment．Theresultsshowedthatthebesteffectofhydrolysisofcaseinarecon

4、ditionsofcaseinconcentration4％，theamountofenzyme2500U／g，temperature50oc，reactiontimeof80rain，thedegreeofhydrolysisis7．30％．AfterjoiningthemoderateSDSunderthesameconditions，thefinalconcentrationofSDSis0．00128g／mL．thedegreeofhydrolysiscanbeincreasedto13．50％．Keywords：casein；trypsin

5、；SDS；degI_eeofhydrolysis酪蛋白是牛乳中主要的蛋白质，约占牛乳蛋白质总量的80％一82％，是一种全价蛋白质，酪蛋白能够为生物体提供必需氨基酸，但酪蛋白坚硬、致密，极难补充消化吸．为此，人们通过对酪蛋白进行水解获得多肽类物质，这些多肽类物质不仅具有营养价值，而且使其吸收利用率大为增加，更重要的是使其具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的功能．目前，在酪蛋白水解物中发现许多多肽类物质，如抗菌肽、免疫活性肽、促进矿物离子吸收肽等．因此，确定蛋白质合适的水解条件尤为必要．但是目前水解存在的问题是：为了追求高水解度，蛋白酶大剂量使用导致成本增

6、加，酶浪费严重．本试验在酶剂量和pH不变的前提下，研究了不同温度、不同作用时间对酪蛋白水解度的影响，再通过加入SDS来提高水解度，目前尚无类似报道．1材料与方法1．1试验材料酪蛋白的制备：取1kg的鲜牛乳，脱脂后醋酸一醋酸钠缓冲液调至pH4．6，使酪蛋白沉淀，4000r／min离心15min后，收集沉淀，再用水洗涤酪蛋白沉淀，再次离心去掉上清液，将沉淀冷冻干燥，即得酪蛋白l71．收稿日期：2013—10—20基金项目：河南科技学院大学生创新实验项目(2011CXSY36)作者简介：于传瑞(1990一)，男，河南濮阳人，硕士研究生．主要从事天然产物化学

7、研究．通信作者：李淑梅(1975一)，女，山西河曲人，硕士，副教授．主要从事天然产物化学研究6于传瑞等：不同条件对胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影响第6期1．2化学试剂胰蛋白酶(Trypsin，上海紫一试剂厂生产，活力单位1：250)，20mmol／L磷酸盐缓冲液(pH7．9)，0．5mol／L的NaOH等，其他试剂均为分析纯．1．3酪蛋白的水解、琏准确称取1．0000g的酪蛋白，用25mL20mmol／L磷酸盐缓冲液(pH7．906)溶解，4调节其2pH至O7．0，加入l0mg胰蛋白酶，置于一定温度的水浴锅中进行水解，加入不同剂量的SDS混匀，经过一定

8、反应时间后，将反应体系置于100oC水浴锅中煮沸5min，使胰蛋白酶失活，反应终止I8_9】．1．4水解度的