生物化学实验

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1、生物化学实验讲义化学工程与技术学院基础部最新范本,供参考！实验一酪蛋白的制备一、目的学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。二、原理．牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。三、器材1、离心机2、．抽滤装置3、精密pH试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计．四、试剂与材料1、牛奶2500mL2、95％乙醇1200mL3、无水乙醚1200mL最新范

2、本,供参考！4、0.2mol／LpH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL5、．乙醇—乙醚混合液2000mL五、操作1、将100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL。用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3000r／min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。2、用水洗沉淀3次，离心10分钟(3000r／min)，弃去上清液。3、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2

3、次，抽干。4、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯晶。5、准确称重，计算含量和得率。含量：酪蛋白g／100mL牛乳(g％)得率：思考题最新范本,供参考！1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？实验二小麦萌发前后淀粉酶活力的比较一、目的1.学习分光光度计的原理和使用方法。2.学习测定淀粉酶活力的方法。3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。二、原理种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。2（C6H10O5）n+nH2OnC12H22O11麦芽糖有还原性，能使3，5---二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基

4、-5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计测定。休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数增加而增加。最新范本,供参考！本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。三、器材1.25mL刻度试管2.吸管3.离心管4.乳钵5.分光光度计6.恒温水浴7.离心机四、试剂和材料1、小麦种子2、o.1％标准麦芽糖溶液精确称量100mg麦芽糖，用少量水溶解后，移入100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。3.pH6.9，0.02mol/L磷酸缓冲液0.2mol/L磷酸二氢钾67.5mL与0.2mol/L磷酸氢二钾82

5、.5混合，稀释10倍。4、1％淀粉溶液1g可溶性淀粉溶于100mL0.02mol/L磷酸缓冲液中，其中含有0.0067mol/L氯化钠。5、1％3，5—二硝基水杨酸试剂最新范本,供参考！将1.00g3，5—二硝基水扬酸溶于20ml2ML1NaOH溶液和50ml水中，加入30g酒石酸钾钠定容至100ml。6、1％氯化钠溶液五、实验操作1、种子发芽小麦种子浸泡2.5小时后，放入25℃恒温箱内或在、室温下发芽。2、酶液提取取发芽第3或第4天的幼苗15株，放入乳钵内，加入1%氯化钠溶液10mL，用力磨碎。在室温下放置20分钟，

6、搅拌几次。然后将提取液离心（1500r/min）6—7分钟。将上清液倒人量筒，测定酶提取液的总体积。进行酶活力测定时，用缓冲液将发芽第3或第4天的幼苗稀释10倍。取干燥种子15粒作对照（提取步骤同上）。3、酶活力测定（1）取25mL刻度试管4支，编号。按下表要求加入各试剂（各试剂须在25℃预热10分钟）1234最新范本,供参考！试管标号试剂干燥种子的酶提取液发芽第3或第4天的幼苗的酶提取液标准管空白管酶液（mL）0.50.5——标准麦芽糖溶液（mL）——0.5—1％淀粉溶液（mL）1111水（mL）———0.5将各管混匀

7、，放在25℃水浴中，保温3分钟后，立即向各管加入1％3，5—二硝基水杨酸溶液2mL。（2）取出各试管，放入沸水浴加热5分钟。冷却至室温，加水稀释至25mL。并混匀。在A500nm处测定各管的吸光度。填入表中试管号干燥种子的酶提取液标准管空白管最新范本,供参考！发芽第3或第4天的幼苗的酶提取液A500nm吸光度4、计算根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，本实验规定：25℃时3min内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活力单位（u）。酶活力计算公式为：式中：C酶酶液麦芽糖的浓度，V酶提取酶液的总体积，n酶酶液稀释倍

8、数。思考题1、为什么此酶提纯整个过程在0—5条件下进行？而测酶的活力时要在25预保温？反应后又放入沸水浴中？2、实验结果说明什么？最新范本,供参考！实验三纸层析法分离鉴定氨基酸一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。层析溶剂由有机溶剂和水组成。物