生物化学实验

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1、生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。三、实验器材1、棉花或滤纸。2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。3、试管1.5*15cm(*4)。四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。2、1%

2、蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。最后以沸蒸馏水稀释至100ml。五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，

3、浓硫酸加入的方式应保持一致。2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。2、试管1.

4、5cm*15cm（*3）。3、水浴锅。四、实验试剂1、塞氏试剂：溶50mg间苯二酚于100ml盐酸中[V(H2O):V(HCl)=2:1],临用时配制。2、1%果糖溶液：称取果糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。3、1%葡萄糖溶液：见实验1.1。4、1%蔗糖溶液：见实验1.1。五、操作于3支试管中分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%果糖溶液各0.5ml。各加塞氏试剂2.5ml，摇匀。同时至沸水浴内。比较各管颜色变化及红色出现的先后次序。六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，并按顺序置于沸水锅内。2、实验过程中，要仔细观察溶液颜色的变化情况。思考题1、在

5、塞氏实验中，反应产生的沉淀为何能够溶于乙醇溶液并产生鲜红色？2、蔗糖为何有塞氏反应？实验1.3杜氏实验一、目的掌握杜氏（Tollen）实验鉴定戊糖的原理和方法。二、原理戊糖在浓硫酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质：本实验虽常用以鉴定戊糖，但并非戊糖的特有反应。果糖、半乳糖和糠醛等都是呈阳性反应、戊糖反应最快，通常在45s内即产生樱桃红色沉淀。三、实验器材1、吸管1.0ml(*3)2、试管1.5cm*15cm(*3)3、水浴锅四、实验试剂1、杜氏试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml，缓缓加入浓盐酸15ml及蒸馏水9

6、ml即得，临时用配制。2、1%阿拉伯糖溶液：称取阿拉伯糖1g，溶于蒸馏水并稀释至100ml。3、1%葡萄糖溶液，见实验1.1。4、1%半乳糖溶液：称取半乳糖1g，溶于蒸馏水并稀释至100ml。五、操作于三支试管中加入杜氏试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，摇匀。将试管同时加入沸水浴中，观察颜色变化，并记录颜色变化的时间。六．注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，并按顺序置于沸水浴锅中。2、实验过程中，要仔细观察溶液颜色的变化情况。思考题1、在Tollen反应分析位置样品时，应注意些什么问题？2、列表总结和比较本实验三种颜色反

7、应的原理及其应用。二、多糖的性质多糖的实验一、目的1、熟悉淀粉多糖的碘实验反应原理和方法。2、进一步了解淀粉的水解过程。二、原理淀粉分布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含量丰富，工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。本实验以马铃薯为原料，利用淀粉不溶于或难溶于水的的性质来制备淀粉。淀粉遇碘呈蓝色1，是由于碘被吸附在淀粉上，形成一复合物，此复合物不稳定，极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去，其他多糖大多数能与碘呈特异的颜色，此类呈颜色物质也不稳定。淀粉在酸催化下加热，逐步水解成分子较小的糖、最后水解成葡萄糖，（C6H10O5）（C4H1