黄连HPLC数字化指纹图谱探究和7种生物碱含量测定

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1、连HPLC数字化指纹图谱探究和7种生物碱含量测定［摘要］该文建立了峨眉地区道地药材黄连的HPLC数字化指纹图谱，并将其在全国不同主产区的黄连测定中进行了应用，同时测定黄连中7种季胺型生物碱的含量，为科学评价与有效控制黄连质量提供依据。采用DiamonsilC18色谱柱(4、6mmX250mm,5um),流动相乙睛-0、025mol•L-1KH2P04溶液(磷酸调pH3、0)(40:60),内含SDS1、7g•L-1,流速1、2mL•min-1,检测波长345nm,柱温40°Co运用中药色谱指纹图谱相似度评价系

2、统(国家药典委员会)进行分析，10批次峨眉产黄连样品得到的指纹图谱相似度均大于0、99,标定共有峰10个，并对其中8个色谱峰进行了归属。全国5个黄连主产区样品与峨眉产黄连进行相似度分析比较，整体相似度高。同时对黄连药材中groenlandicine,非洲防己碱，药根碱，表小槃碱，黄连碱,巴马汀，小漿碱7种主要生物碱进行了含量测定。该方法灵敏度高、专属性强，HPLC指纹图谱结合生物碱含量测定能全面反应其内在质量，为黄连的质量控制提供科学依据。［关键词］黄连；HPLC；指纹图谱；含量测定［收稿日期］2013-05

3、-03［基金项目］科技部国家科技支撑计划重点项目(2007BA140B05)；中国博士后科学基金第6批特别资助项目(2013T60863)［通信作者］*张浩，教授，博士生导师，Tel:(028)85503037,E-mail：zhanghhx@vip、sina、com黄连为毛萇科植物黄连CoptischinensisFranch、的干燥根茎，常用中药材，主产于四川峨眉、洪雅、彭州，重庆石柱、巫山，湖北利川等地［1］,其中峨眉历来是黄连的道地主产区，栽培历史悠久，在历代本草《名医别录》、《唐本草》、《本草纲目》

4、等中均有记载［2］。黄连中所含的生物碱主要有小漿碱、巴马汀、黄连碱、表小漿碱、药根碱等［3-4］季胺型生物碱。小樂碱及其衍生物除了具有抗炎抗菌［5-6］的作用外，还在治疗肿瘤［7-10］、糖尿病［11-14］,心血管疾病［15-16］、高血脂［17］、脑缺血性损伤［18］等多方面具有药理作用。中药的化学成分复杂，在质量控制中采用单一成分或某几个成分难以反映中药材的整体特征，建立简便可行的指纹图谱方法，确定其特征的共有峰图谱，是从整体上控制其质量已成为普遍运用的方法［19-21］o本文采用HPLC,选择了四川峨

5、眉地区具代表性的10批次黄连药材样品进行了分析测定，以生物碱类成分作为评价指标，建立了峨眉山地区黄连药材的生物碱指纹图谱，确定了10个共有峰，其分离度和重现性均较好，同时测定了7种季胺型生物碱的含量。并且为了准确反应与评价生物碱类成分在黄连内的形成、积累等与环境影响因素的关系，本文将所建立的方法在全国不同主产区进行了应用，结果表明整体相似度均在0、99以上，但在生物碱的含量上存在较大差异。1材料ShimadzuLCTOAtvp高效液相色谱仪（LC-10Atvp泵、SPD-lOAvp紫外检测器、CTO-OlAs

6、vp柱温箱、SCL-lOAvp系统控制器、Class-vp色谱工作站）；DiamonsilC18色谱柱（4、6mmX250mm,5Um）；中药色谱指纹图谱相似度评价系统（中国药典委员会2004A）；BP211D1/10万电子天平（德国Sartorius公司）；KQ3200超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司，工作频率40kHz,超声功率120W）；pH计（PHS-3C型，上海雷磁）。乙月青（美国Fisher公司）色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。黄连对照药材、盐酸小菓碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱对照品均购自

7、中国食品药品检定研究院；黄连碱、表小樂碱、非洲防己碱、groenlandicine.木兰花碱由作者分离、纯化制备，并经红外、紫外、核磁、质谱鉴定，纯度均达99%（相对纯度）以上。黄连药材由作者采集及四川大学华西药学院标本室提供，经四川大学华西药学院生药教研室张浩教授鉴定为黄连C、chinensis的干燥根茎，见表1。表1黄连药材样品Table1SamplesofCoptidisRhizomaNo、采集地点No、采集地点1四川峨眉山市龙池镇高万村9四川峨眉山市川主乡荷叶村2四川峨眉山市龙池镇陶渊村10四川峨眉山

8、市大为镇中山村3四川峨眉山市龙池镇金川村11四川彭州白鹿镇4四川峨眉山市龙池镇富友村12四川峨眉山市洪雅高庙5四川峨眉山市沙溪乡林坝村13湖北利川6四川峨眉山市高庙镇黄茅村14四川巫山7四川峨眉山市高桥镇张沟村15重庆石柱8四川峨眉山市龙门乡杨林村2方法与结果2、1色谱条件流动相为乙月青-0、025mol-L-1KH2P04溶液（磷酸调pH3、0）（40:60）,内含十二烷基硫酸钠（SDS）1、7g