石蒜的指纹图谱及其生物碱的含量测定研究

《石蒜的指纹图谱及其生物碱的含量测定研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、石蒜的指纹图谱及其生物碱的含量测定研究贾晓东姚欣梅陈为民管志建徐霞冯煦【摘要】目的研究石蒜的指纹图谱。方法高效液相色谱法，紫外检测器(VethodsHPLCandacetonitrile-methol-l/min.ResultsTheRSDofrelativeretentiontimeandpeakareaofcoexistpeaksmettomethodrequirementduringtheinvestigationofprecision，stabilityandrepeatibitytrials．Allofthe10batchesofsamplessharedahighsimi

2、larity.Atthesametime,thecontentsofthreealkaloidsin10batchsamplesandothersamplesined.ConclusionThefingerprintofLycorisradiate（L＇Her.）Herb.canbeusedastheircharacteristicchromatographyfingerprintofShisuan．Keyine；Fingerprint；HPLC石蒜Lycorisradiate（L＇Her.）Herb.为石蒜科石蒜属植物，又名龙爪花、红花石蒜等。鳞茎含有多种生物碱，药理实验证明其中的

3、生物碱类具有多种活性。从石蒜中提取的加兰他敏已作为药物在包括美国、加拿大等23个国家批准和上市，用于治疗阿尔茨海默病(简称AD)〔1〕。加兰他敏、力可拉敏也已在临床用于治疗小儿麻痹后遗症。然而由于石蒜的品种繁多，每种之间成分含量有一定的差异，因此对石蒜建立合适的质量控制方法是很有必要的。国内石蒜的资源主要分布在江苏、浙江及安徽3省，占国内资源种类的80％以上〔2〕。按照国家药品监督管理局2000年颁发的“中药注射剂指纹图谱技术要求”的有关规定〔3〕，对产于江苏的不同采集地点的10批石蒜建立了HPLC指纹图谱方法。建立其指纹图谱是为了反映其质量情况，为建立稳定、可靠、全面的质量控制方法

4、提供科学依据。同时对其中所含的3种生物碱的含量进行了测定。1器材1.1样品本实验植物样品包括产于江苏的石蒜Lycorisradiate（L＇Her.）Herb.10份，产于湖南的石蒜1份，中国石蒜、忽地笑、换锦花各1份，其编号、采摘地点及采摘时间等见表1。样品采收后取鳞茎，洗净切小块，在60℃下烘干备用。1.2对照品石蒜碱、力可拉敏、加兰他敏对照品，福建利科生物技术有限公司提供，批号：061210-2，纯度≥98％。1.3试剂及仪器乙腈、甲醇：HPLC级；三乙胺：AR级；去离子水。美国Agilent公司1100液相色谱仪，HPChemstation色谱工作站，紫外检测器（VenexG

5、eminiC18柱（4.6mm×250mm，5μm），Gemini预柱。2方法2.1色谱条件经方法学研究确定色谱条件，流动相A∶水（三乙胺调节pH值至9.0～9.2之间）；流动相B：乙腈；流动相C：甲醇。梯度洗脱程序见表2。柱温40℃；流速1.0ml/min；检测波长232nm；进样量10μl。表1植物样品的采集情况表2梯度洗脱程序2.2参照物标准液制备精密称取石蒜碱、力可拉敏、加兰他敏标准品，甲醇定容分别配成0.36，0.34，1.00mg/ml的原液备用。2.3供试液的制备取如上干燥植物样品，粉碎，过40目筛。精密称定6.0g，置索氏提取器中，加10％的氢氧化钠10ml混匀润湿，

6、放置15min。分别用25ml醋酸乙酯在75℃水浴回流提取3次，第1次提取2h，后两次均为1h，合并提取液。过滤，减压蒸干，用少量甲醇溶解洗涤，定容至10ml，用0.45μm微孔滤膜滤过后作为供试品溶液。2.4稳定性实验取石蒜5号样品供试液，分别在0，4，8，12，24h检测指纹图。结果各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值基本一致，RSD＜3％，供试品溶液在24h内稳定，符合指纹图谱技术要求。2.5精密度实验取石蒜11号样品供试液，连续进样5次，检测指纹图。比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜3％，符合指纹图谱的检

7、测要求。2.6重复性实验取石蒜3号样品5份，按供试品溶液制备方法制备供试品，检测指纹图。并分别按上述液相条件测定，对共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，5份供试品溶液的RSD＜3％，符合指纹图谱的要求。2.7样品测定精密吸取标准对照品溶液和供试液各10μl，分别注入液相色谱仪，按“2.1”项中色谱条件测定，即得。以石蒜碱色谱峰（S峰）的保留时间及峰面积为1，计算各共有指纹峰的相对保留时间和峰面积比值。并按“中药注射剂指纹图谱研究的技术要求”建立石蒜药