猪链球菌的实验室分离与鉴定

《猪链球菌的实验室分离与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、猪链球菌的实验室分离与鉴定猪链球菌病(SwineStreptococcosis)是危害养猪业的一种常见传染病。在我国，对猪危害最严重的以C群兽疫链球菌为主，其次是D群，L群、S群和R群也可引起，E群主要引起关节炎和淋巴结脓肿。猪链球菌病在临床上可分为败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等。哺乳仔猪和刚断乳仔猪发病主要以败血症型、脑膜炎型为主，发病率和死亡率均较高。肥育猪发病多以关节炎或淋巴结脓肿为特征，其死亡率较低，但影响生长发育。2005年12月，郑州南郊某猪场仔猪流行关节炎及败血症，多为2〜6周龄仔猪病猪精神不振，食欲减少或废绝，体温40.0°C〜41・5°C,呈

2、稍留热，眼结膜潮红，眼睑稍水肿多数病猪呼吸迫促部分仔猪有关节炎症状，关节肿胀、疼痛、后肢不能站立个别猪突然发病，出现神经症状病死猪腹侧皮肤及皮下瘀血，血液呈暗红色，凝固不良，肺呈红色，体积增大，切面有大量的红色泡沫，脾、肝局部瘀血、肿胀，呈暗红色，肠系膜淋巴结肿大，胃底部岀血，四肢关节腔滑液多且浑浊。根据临床及剖检，初步诊断为猪链球菌病，并无菌采取关节炎病猪的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实验室分离鉴定，证实为猪链球菌。现将分离鉴定结果报告如下。1试验材料1.1病料无菌采患关节炎病猪的关节液，无菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料。1.

3、2试剂染色液、常规试剂自行配制。1.3培养基生化实验用培养基、营养肉汤培养基、普通营养琼脂培养基和血清肉汤培养基按常规方法配制，鲜血琼脂平板由郑州牧专实验设备管理科提供。1.4药敏纸片由郑州牧专实验设备管理科捉供。1・5试验动物健康小白鼠10只，由郑州牧专动物医药系实验动物小心提供，观察一周，健康者做动物致病性实验用。2方法2.1涂片镜检无菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料，制作肝脏、脾脏的触片，用关节液、心血涂片，干燥、火焰固定后进行革兰氏染色镜检。2.2细菌分离培养无菌采集的肝、帅、脾及肠系膜淋巴结、关节液等病料分别划线接种鲜血琼脂平板，37°C培

4、养24〜48小时后，观察菌落特征，选取鲜血琼脂平板上微小、圆形、边缘整齐、略带灰白色、需滴样、冇明显的B型溶血环的单个菌落的小部分革兰氏染色、显微镜检查呈成对或短链状革兰氏阳性球菌后，菌落的其余部分再分别接种于普通琼脂斜面培养基、血清肉汤培养基、营养肉汤培养基，置37°C温箱内培养24〜48小吋，如此获得分离菌的纯培养物及在不同培养基上的生长情况。2.3培养特性检查观察其在不同培养基上的生长情况，并涂片、染色、镜检。将纯培养物接种丁鲜血琼脂斜面培养基，分别置于37°C、10°C和45°C条件卜，培养24〜48小时，观察其能否生长。2.4生化试验特性检杳分离菌血清肉汤培养物分

5、别接种于各种生化培养基，37°C培养24〜48小时后，观察其生化反应特性。2.5约敏试验采用纸片扩散法，根据药敏试验要求的距离，用无菌棉签蘸取分离菌的肉汤培养物，涂布法接种于琼脂平板待稍干后，用无菌铁了将各种药墩纸片分别平贴在培养基表而，37°C培养20〜24小时，观察结果，分别测定抑菌环的直径。判定标准：抑菌环直径在15mm以上为高度敏感，10〜15mm为屮度敏感，10mm以下为低度敏感，无抑菌环为不敏感。2.6动物试验健康小白鼠10只，随机分为2组，每组5只，其屮一•组无菌吸取上述肉汤培养物0.5ml/只分别腹腔注射作为实验组另外一•组5只小白鼠接种无菌生理盐水做对照。

6、每天观察其死亡和发病情况。3结果3.1涂片镜检革兰氏染色、显微镜检查为革兰氏阳性球菌，呈成对或短链状排歹(I。3.2培养特性37°C培养24小时后，在鲜血琼脂平板上形成半透明、表面光滑、微隆起的灰白色露珠状的小菌落，外层有明显的P溶血环，生长良好在普通琼脂平板上菌落贫瘠，比血琼脂平板小在血清肉汤中先均匀浑浊，后在试管底部形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。染色镜检：革兰氏阳性球菌，固体培养基中的呈3〜5个连成链排列，液体培养基中的则呈4〜8个连成链排列，或者更长。鲜血琼脂斜面培养基10°C和45°C条件下培养24〜48小时，均无生长，37°C生长良好。1.3生化试验结果见表1。

7、表明生化反应结果均符合猪链球菌的生化特性，说明分离的菌均为猪链球菌。表1分离菌生化试验结果葡萄糖+甘露醇+山梨醇一杨昔+蔗糖+麦牙糖+乳糖+菊糖+棉实糖一葡萄糖+M-R试验一三糖铁+V-P试验一靛基质一注〃表示大多数菌株为阳性〃一〃表示大多数菌株为阴性。1.4动物试验结果5只兔了在接种后36〜84小时呈现不同的症状变化，其中1只在接种后48小时左右衰竭死亡1只在接种后72小时后衰竭死亡另外3只表现为食欲减退、精神沉郁、颌下淋巴结肿胀。剖检可见其肝、脾、肾肿大，膀胱高度充盈，胸腔积液，心冠脂肪出血，用死鼠的心血及胸腔