猪链球菌的分离与鉴定

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1、猪链球菌的分离与鉴定论文完成日期：2000年6月15日目录摘要………………………………………………1前言………………………………………………21.试验材料……………………………………….22.方法…………………………………………….22.1病原分离……………………………………..22.2分离菌株的鉴定……………………………..22.3致病力及保护力试验………………………..32.4药敏试验……………………………………..33.结果…………………………………………….43.1分离菌的培养特性及形态特征….………….43.2生化试验结果………………………………..53.

2、3血清学鉴定结果……………………………..53.4致病力试验及保护力试验结果……………..53.5细菌回收试验结果…………………………..53.6药敏试验结果………………………………..54分析与讨论…………………………………….6参考文献…………………………………………7猪链球菌的分离与鉴定摘要2000年4月，陕西省岐山县种猪繁育场仔猪流行关节炎和败血症。无菌采取患关节炎猪的关节液和患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结各8份病料，并对这16份病料进行病原菌分离试验、血清学鉴定、致病力试验、保护力试验、细菌回收试验、药敏试验。结果表明：该病原菌为2型猪链球菌，引起关

3、节炎的猪链球菌较引起败血症的猪链球菌致病力弱；该菌对头孢菌素、青霉素高度敏感。关键词：猪链球菌分离鉴定前言猪链球菌（Streptococcosissuis）是猪的一种重要疾病，养猪业发达国家如美、英、荷及爱尔兰等常有本病发生。我国于1958年就有猪链球菌病的报道，1976年我国南方几省曾一度广泛流行，给我国养猪业带来了很大危害。猪链球菌截止到目前已发现的荚膜型已超过30种[1]。我国于1995年首例鉴定证实2型猪链球菌在我国的存在[2]。猪链球菌可致2—6周龄仔猪败血症、脑膜炎、关节炎及支气管肺炎等[3-7]。病猪和带菌猪是本病的重要传染源，病猪的鼻液、尿液、血液、

4、肌肉、内脏和关节内均可检出病原体。未经无害处理的病死猪肉、内脏及废弃物是散播本病的重要原因，呼吸道是本病的主要传播途径。本病一年四季均可发生，但以4—10月份发生较多。本病常为地方性流行性，多呈败血性。短期波及全群，如不进行防治，则发病率、病死率很高，慢性常为地方性散发性传染。2000年4月，岐山县种猪繁育场仔猪流行关节炎及败血症，多为2—6周龄仔猪。无菌采取关节炎病猪的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实验室分离鉴定，证实为2型猪链球菌。现将分离鉴定结果报告如下。1．实验材料1．1病料无菌采取岐山县种猪繁育场患关节炎病猪的关节液8份，编号为1—8号，

5、无菌采取患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结8份，编号为9—16号。1．2试剂试验所用的各种糖均购自上海化学试剂二厂，批号自95—98年不等。1．3培养基绵羊鲜血平板、匹克氏增菌液、10ml/L猪血清肉汤及各种糖培养基按常规方法制备[8]。1．4血清学试验猪链球菌诊断血清与平板凝集抗原均购自中国兽药鉴察所，批号为990705。1．5药敏纸片购自浙江省军区后勤部，批号20000312。1．6试验动物健康小白鼠（30—35g）50只，购自第四军医大学实验动物中心。2．方法2．1病原分离将所采病料分别涂片，革兰氏染色镜检，然后，分别接种鲜血琼脂平板。37℃需氧培养24h后

6、，挑取可疑菌落接种于匹克氏增菌液，37℃培养24h后，革兰氏染色，显微镜检查，再接种血清肉汤，纯化后放置4℃，冷藏备用。2．2分离菌株的鉴定2．2．1生化试验随机抽取上述分离菌血清肉汤培养物3#、8#、13#、15#，分别接种于蔗糖、山梨醇、棉实糖、葡萄糖、甘露糖、蕈糖、乳糖、菊糖、水杨苷、马尿酸钠培养基，37℃培养24h后，观察其对糖的利用情况。2．3．1菌落形成单位的测定按常规方法进行[9]2．3．2致病力试验无菌吸取上述血清肉汤培养物（含菌量5.0*108CFU/ml）以0.1ml/只、0.2ml/只、0.3ml/只、0.4ml/只、0.5ml/只分别腹腔注射

7、小白鼠2只，观察其死亡时间和数量，测定其最小致死量。再将上述血清肉汤培养物腹腔注射小白鼠，小白鼠共14只，分7组。第一组，每只小白鼠注射3#菌0.2ml，第二组每只注射8#菌0.2ml，第三组每只注射3#、8#菌各0.1ml，第四组每只注射13#菌0.2ml，第五组每只注射15#菌0.2ml，第六组每只注射13#、15#菌各0.1ml，第七组每只注射无菌血清肉汤1.0ml。以上各组分别饲养观察其死亡时间及数量。2．3．3保护力试验将3#、8#、13#、15#血清肉汤培养物分别接种于18cm鲜血平板。37℃培养24h后，收菌，用麦氏比浊管比浊，适当稀释，然后用0.