《论文_猪链球菌的分离与鉴定(定稿)》

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1、猪链球菌的分离与鉴定2000年4月，陕西省岐山县种猪繁冇场仔猪流行关节炎和败血症。无菌釆取患关节炎猪的关节液和患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结各8份病料，并对这16份病料进行病原菌分离试验、血清学鉴定、致病力试验、保护力试验、细菌冋收试验、药敏试验。结果表明:该病原菌为2型猪链球菌，引起关节炎的猪链球菌较引起败血症的猪链球菌致病力弱；该菌对头砲菌素、育需素高度敏感。关键词：猪链球菌分离与鉴定论文完成日期：2000年6月15日H录摘要1前言21.试验材料.22.方法.22.1病原分离..22.2分离菌株的鉴定..22.3致病力及保护力试验..32.4药敏

2、试验33.结果42.2牛化试验结果..52.3血清学鉴定结果..52.4致病力试验及保护力试验结果51.5细菌回收试验结果53.6药敏试验结果..54分析与讨论•6参考文献7猪链球菌的分离与鉴定摘要2000年4刀，陕西省岐山县种猪繁育场仔猪流行关节炎和败血症。无菌采取患关节炎猪的关节液和患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结各8份病料，并对这16份病料进行病原菌分离试验、血清学鉴定、致病力试验、保护力试验、细菌回收试验、药敏试验。结果表明:该病原菌为2型猪链球菌，引起关节炎的猪链球菌较引起败血症的猪链球菌致病力弱；该菌对头他菌素、青每素高度敏感。关键词：猪链

3、球菌分离鉴定HiJ0猪链球菌(Streptococcosissuis)是猪的一种重要疾病,养猪业发达国家如美.英、荷及爱尔兰等常有木病发生。我国于1958年就有猪链球菌病的报道，1976年我国南方儿省曾一度广泛流行，给我国养猪业帯来了很大危害。猪链球菌截止到目前已发现的荚膜型已超过30种［1］。我国于1995年首例鉴定证实2型猪链球菌在我国的存在［2］。猪链球菌可致2—6周龄仔猪败血症、脑膜炎、关节炎及支气管肺炎等［3-7］o病猪和带菌猪是本病的車要传染源，病猪的鼻液、尿液、血液、肌肉、内脏和关节内均可检出病原体。未经无害处理的病死猪肉、内脏及废弃物是散播

4、木病的重要原因，呼吸道是木病的主要传播途径。本病一年四季均可发生，但以4-10M份发生较多。木病常为地方性流行性，多呈败血性。短期波及全群，如不进行防治，则发病率、病死率很高，慢性常为地方性散发性传染。2000年4刀，岐山县种猪繁育场仔猪流行关节炎及败血症，多为2—6周龄仔猪。无菌采取关节炎病猪的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实验室分离鉴定，证实为2型猪链球菌。现将分离鉴定结果报告如下。1•实验材料1.1病料无菌采取岐山县种猪繁育场患关节炎病猪的关节液8份，编号为1—8号，无菌采取患败血症猪的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结8份，编号为9-16号

5、。1.2试剂试验所用的各种糖均购自上海化学试剂二厂，批号自95-98年不等。1.3培养皋绵羊鲜血平板、匹克氏增菌液、10ml/L猪血清肉汤及各种糖培养皋按常规方法制备［8］。1.4血清学试验猪链球菌诊断血清与平板凝集抗原均购自屮国兽药鉴察所，批号为990705c1.5药敏纸片购口浙江省军区后勤部，批号20000312。1.6试验动物健康小白鼠(30—35g)50只，购自第四军医大学实验动物中心。1.方法1.1病原分离将所采病料分别涂片，革兰氏染色镜检，然后，分别接种鲜血琼脂平板。37°C需氧培养24h后，挑取可疑菌落接种于匹克氏增菌液，37°C培养24h后

6、，革兰氏染色，显微镜检查，再接种血清肉汤，纯化后放置4°C,冷藏备川。1.2分离菌株的鉴定1.2.1牛化试验随机抽取上述分离菌血清肉汤培养物3#、8#、13#、15#,分别接种于蔗糖、山梨醇、棉实糖、葡萄糖、廿露糖、蕈糖、乳糖、菊糖、水杨序、马尿酸钠培养基，37°C培养24h后，观察其对糖的利川情况1.2.2血清学鉴定将3#、8#、13#、15#菌经缓冲肉汤培养8h,通过3000r/min离心lOmin,PBS洗涤2次,用Ph7.2的O.Olmol/LPBS制成1*1010~2*1010细菌悬液。取1滴上述细菌悬液与适当的抗血清在洁净玻片上混匀，立即观察凝

7、集现彖。同时，设立细菌悬液对照及血清对照。2.3致病力及保护力试验2.3.1菌落形成单位的测定按常规方法进行[9]2.3.2致病力试验无菌吸取上述血清肉汤培养物（含菌量5.0*108CFU/ml）以0.1ml/只、0.2ml/只、0.3ml/只、0.4ml/只、0.5ml/只分别腹腔注射小白鼠2只，观察其死亡时间和数量，测定其最小致死量。再将上述血清肉汤培养物腹腔注射小白鼠，小白鼠共14只，分7组。第一纽，每只小白鼠注射3#菌0.2ml，第二组每只注射8#菌0.2ml,第三组每只注射3#、8#菌各0.1ml,第四组每只注射13#菌0.2ml,第五组每只注射

8、15#菌0.2ml,第六组每只注射13#、15#菌各0.lml,第