牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定

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1、牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定学生：指导教师：［摘要］:通过调节牛奶的pH法分从牛奶中离出酪蛋白和乳糖，并对其进行鉴定［关键词］:牛奶;酪蛋白；乳糖；分离；鉴定牛奶是一种营养价值很高的食詁，主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，含量约为2.6g/lOOmL,占牛奶中蛋口质总量的80%。酪蛋白含冇人体必需的8种氨基酸，极易消化吸收，是优质氨基酸供给源,成为婴幼儿及幼畜的主要蛋口源，牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它是唯一曲哺乳动物合成的糖，它是在乳腺中被合成的。乳糖是成长中的婴儿建立其发育屮的脑

2、干和神经组织所需的物质。由于酪蛋白与乳糖在食品加工、医药等领域具有广泛的用途，所以对分离方法的研究具有重要的经济效益和社会效1.原理部分牛奶屮的蛋白质主要是酪蛋白，约占牛奶含量的34%,实际上，酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以其钙盐形式存在，即酪蛋口钙。利用蛋口质在等电点时溶解度较小的特性,把牛奶的PH值调到酪蛋白的等电点(PH二4.8)来沉淀分离酪蛋白：酪蛋白不溶于乙醇，所以可用乙醇将其中的脂肪洗涤除去。乳糖也是不溶于乙醇的，所以当乙醇混入水溶液中时，乳糖会结晶出来，扶而达到分离的口的O2.实验部分2.1实验试剂醋

3、酸、无水乙醇、95%乙醇、乙醸、碳酸钙等均为分析纯；市售袋装纯牛奶。2.2实验仪器烧杯(600ML)；温度计;420A酸度计;SHZ—D(HI)真空抽气泵；恒温水浴锅;白纱布；布氏漏斗；锥形瓶；表而血。2.3实验方法2.3.1酪蛋口的提取取lOOmL新鲜纯牛奶于250mL烧杯中，恒温水浴加热至40°C后加入10%醋酸溶液，调pH值至其等电点附近(PH=4.8)o用纱布过滤，用少量水洗涤沉淀2—3次。加人30niL95%的乙醇，搅拌后用布氏漏斗过滤，用乙酉迷和乙醇等体积混合液20讥洗涤沉淀2次，用15mL乙醯分2次洗涤酪蛋白，用

4、布氏漏斗过滤,把固体转移到表面皿上，放于恒温干燥箱中干燥Id。称量，并计算牛乳中酪蛋白的含量。2.3.2乳糖的分离把上述实验中用纱布过滤的滤液加入碳酸钙，加热至沸腾lOmin,过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩至15讥，加人95%乙醇90n±,继续加热，待英混合均匀后,趁热抽滤，将滤液移至锥形瓶中，加塞放置1—2d。过滤，分离出乳糖品体，用95%乙醇洗涤结晶，干燥后称重，计算牛乳中乳糖含量。2.3.3酪蛋白的鉴定(1)缩二腋反应：在小试管中加人5滴酪蛋口溶液和5滴5%NaOH溶液，摇匀后加人2滴1%硫酸铜溶液。将试管振摇；溶液颜色变为

5、紫色。(2)蛋口黄色反应：在小试管中，加人10滴酪蛋白溶液及3滴浓硝酸，水浴中加热，生成黄色硝基化合物。冷却后再加人15滴5%NaOH溶液，溶液呈橘黄色。(3)苗三酮反应:在小试管中加人10滴酪蛋白溶液,然后加4滴苗三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现。2.3.4乳糖的鉴定(变旋光现象)(1)准确称取1.25呂乳糖，用少量蒸帼水溶解,转人25皿容量瓶中定容，将溶液装于旋光管中，立即测定其旋光度。每隔lmin测定1次，至少测定6次，8min内完成，记录数JEolOmin后，每隔2min测定1次，至少测定8次，20min内完成。记录

6、数据并计算岀比旋光度。迅即在样品管中加入2滴浓氨水摇匀，静置20min后测其旋光度并计算出比旋光度。2.实验注意事项⑴酪蛋口等电点随温度不同而变化，等电点pH为4・6—4.8。分离酪蛋口时,边加醋酸，边搅拌，边测pH,同时观察沉淀。开始快搅拌，接近等电点时，应慢搅拌。(1)酪蛋白沉淀用纱布过滤比较好，同吋进行抽滤。用滤纸很难过滤；(2)用乙醇和乙瞇清洗酪蛋口沉淀时，应将酪蛋口捣碎，并在溶剂中搅拌、浸泡,充分洗净脂肪。纯净的酪蛋白应为白色，若发黄表明脂肪未洗干净。(3)用双缩腺法测定酪蛋口的含量时，应使酪蛋白与双缩啄试剂反应完全

7、，否则测量结果不准。(4)首次结晶出来的乳糖含有杂质，一般需要重结晶，否则乳糖难以溶解，且溶液混浊，测定的旋光度不准。⑹测定乳糖的平衡旋光度时，应放置数小时或加入2滴浓氨水，待平衡后再测。3.实验结论从牛奶屮分离酪蛋白和乳糖，此方法简单.方便，易于操作，收得率也较高。需要注意的是所使用的牛奶应是新鲜牛奶，在操作过程中温度和酸度都应控制在适宜的范围Z内。英最佳实验参数为：捉取温度40°C,pH值4.8,乙醇用量20讥/lOOmL牛奶;乳糖分离的最佳实验参数为：pll值4.8,碳酸钙用量2.5g/lOOmL牛奶,结晶时间4d。参考

8、文献：［1］张宗岩.乳与乳制品的物理化学［M］・北京:中国轻工业出版社,1987：168—170.［2］邵锦震，易理清.电沉淀分离酪蛋白方法的探讨一兼对黄石市场鲜牛奶质分析［〕］•湖北师范学院学报，2004［3］陈忠平.牛奶中酪蛋口和乳糖的分离［J］・安徽技术师范学院学报，2