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《牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度鉴定论文伏孟瑜》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定谢青翠吴艳贞马冬妮（大理学院药学与化学学院大理671000）摘要：本文通过用等电沉淀法从牛奶中分离酪蛋口和乳糖，并且采用颜色反应和旋光性鉴定酪蛋白和乳糖。关键词：牛奶；酪蛋白；乳糖；分离；鉴定IsolationandidentificationofcaseinandlactoseinmilkXIEQing-cui,WUYan-zhen,MADong-ni（CollegeofpharmacyandChemistry,DaliUniversity・Dali671000,
2、Yunnans,China）Abstract：Thispaperisolatedbyisoelectricprecipitationofcaseinandlactosefrommilk,andtheuseofcolorreactionsandopticallyactiveidentificationofcaseinandlactose.Keywords：Milk;Caseinprotein;Lactose;Isolation;Identification牛奶是一种乳状液主要曲水、脂肪、蛋白质、乳
3、糖和盐组成。酪蛋片是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋片质的复杂混合物。蛋片质是两性化合物，当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点（pH二4.8）吋蛋白质所带正、负电荷相等，呈电屮性，此吋酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来，以此分离酪蛋口。因酪蛋口不溶于乙醇和乙醯，可用此网种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。乳糖是一种二糖，它由D-半乳糖分子L上的半缩醛轻基和D-葡萄糖分子C4上的醇疑基脱水通过B-1,4昔键连接而成。乳糖是还原性糖，绝大部分以—乳糖和0-乳糖两种同分异构体型态存在,20°C时a-乳糖的比旋光度
4、为+86°,B-乳糖的比旋光度为+35°,水溶液屮两种乳糖可互相转变，因此其水溶液有变旋光现象。乳糖也不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出來，从而达到分离的目的。1材料、仪器与试剂1.1材料来思尔袋装纯牛奶1.2仪器DF—101S恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限公司）、SI1Z—D（UI）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司）、圆盘旋光仪、酸度计1.3试剂10%醋酸溶液、95%乙醇、乙瞇、碳酸钙固体、1%CuS04溶液、5%Na0H溶液、苗三酮溶液、浓硝酸溶液、浓氨水2实验方法2.1
5、牛奶中酪蛋白的分离取100mL新鲜牛奶,在恒温水浴屮加热至40°C,边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH-4.&用尼龙布过滤酪蛋白并用蒸憾水洗涤一两次（在滤液中加入一定量的粉状碳酸钙并搅拌儿分钟，留作下面的实验2.2使用。）把沉淀转移至烧杯中，依次用乙醇、乙醇和乙瞇的等体积混合液、乙醯洗涤酪蛋白，去除脂肪，每次洗涤都用玻璃棒充分搅拌酪蛋口以很好的除去脂肪。抽滤后把固体转移至表而皿上，让乙醯挥发掉，称其重量得9・0g。2.2牛奶中乳糖的分离将2.1中加入碳酸钙的滤液进行加热，使其沸腾一段时间
6、后，抽滤以除去蛋白质和多余的碳酸钙，把滤液转移至烧杯中浓缩至约15mL,稍冷后，在热溶液中加入约90mL95%乙醇,再加热，使其混合均匀，趁热过滤，滤液应澄清。滤液移至锥形瓶中，加塞，放置1-2天，让乳糖充分结晶，过滤分离出乳糖晶体。用冷的95%乙醇洗涤结晶，一般应对乳糖重结晶,干燥后称重得1.94go2・3牛奶中酪蛋白的鉴定2.3.1双缩腺反应在小试管中加入5滴酪蛋口溶液和5滴5%NaOII,摇匀后加入2滴1%硫酸铜溶液。将试管振摇；观察颜色变化。2.3.2苛三酮反应在小试管中加入10滴酪蛋白
7、溶液，然后加4滴苗三酮试剂，加热至沸腾，即冇蓝紫色出现。2.3.3蛋白黄色反应在小试管中，加入10滴酪蛋口溶液及3滴浓硝酸,水浴中加热,生成黄色硝基化合物。冷却后再加入15滴5%NaOH溶液,溶液呈橘黄色。2.4牛奶中乳糖的旋光度测定准确称取1.25g乳糖，用少量蒸懈水溶解，转入25n)L容量瓶中定容，将溶液装于旋光管中，立即测定其旋光度。每隔lmin测定1次，至少测定6次，8min内完成，记录数据。lOmin后,每隔2min测定1次,至少测定8次,20min内完成。记录数据并计算出比旋光度。迅
8、即在样品管中加入2滴浓氨水摇匀，静置20min后测其旋光度并计算出比旋光度。3结果与讨论3.1实验结果从100ml牛奶中分离得到的酪蛋白的质量为9.0g,则牛奶中酪蛋白的含量为9.0g/100mLo从100ml牛奶屮分离得到的乳糖的质量为l・94g,则牛奶屮乳糖的含量为1.94g/100mLo在酪蛋口的鉴定实验中，加入双缩啄试剂时溶液呈紫色；加入苗三酮时溶液呈紫色；加入浓硝酸加热后产生黄色沉淀，加入氢氧化钠后溶液呈橘黄色。在牛奶中乳糖的旋光度测定实验中，乳糖溶液较浑浊未测岀旋光度。3.2讨论分别
