混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞原代培养及鉴定

《混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞原代培养及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、混合酶消化法大鼠颅盖骨细胞原代培养及鉴定基金项目：福建省自然科学基金项目（编号：2908）作者单位:350004福建医科大学省立临床学院（孙玲）;福建省立医院（侯建明）通讯作者：侯建明【摘要】目的通过不断的摸索，寻找一种获得细胞数量较多且纯的原代成骨细胞的体外培养方法，为下一步实验研究奠定基础。方法取出生24h内的SD大鼠脱臼处死，取出颅盖骨，剪成1mmx1mmxlmm大小的组织片；采用胰酶和I型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞；采用“差速贴壁法”进行纯化。通过对细胞形态学的镜下观察，碱性磷酸酶染色及I型胶原免疫组化法等对细胞进行鉴定。结果镜下观察所获得的细胞具

2、有成骨细胞的典型特征，细胞多为单核，呈三角形、多边形、长梭形等形态，并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及I型胶原免疫组化染色呈阳性。结论采用混合酶消化法可获得数量较多且活性较好的细胞，再采用“差速贴壁法”可以去除成纤维细胞等杂质细胞，获得纯度较高的成骨细胞。【关键词】成骨细胞；原代培养；大鼠；混合酶消化法PrimarycultureandidentificationofratscranialcoverosteocytesSUNLing,HOUJian-ming.FujianMedicalUniersity,Fuzhou350004,China[Abstract]Objec

3、tiveThroughcontinuousexploration,wewanttosearchforamethodofcultivatingtheoriginalgenerationosteoblastsinvitrowhichcangetsalargerquantityandpuretheoriginalgenerationofosteoblasts,toprepareforthenextexperimentresearch.Methods24hoursoldofSDratswereexecutedbydislocating.Thecranialcoverbones

4、ofratswereremovingandcutingintotheblocksof1mmx1mmx1mmsize・Thecrinialbonesweredigestingbymixedenzymewhichcontainsenzymeandltypecollagenase.Theosteoblastwerepurifiedbyselectiveplatingtechnique.Theosteoblastswereidentifiedthroughmorphlogyobservation,alkalinephosphatasedyeing,collagenlimmun

5、ohistochemicalstaining.ResultsTheculturedcellshavethetypicalfeaturesofosteoblast.Thecellsaretriangle,polygonal,Iongspindleshape,etc.andmostlyaremononuclearcells,havelargepseudopodia・Alkalinephosphatasedyeingcollagenlimmunohistochemicalstainingarebothpositive.ConclusionAlargequantityanda

6、ctivityofthegoodcellswereobtainedbymixedenzymedigestionmethod・Highpurityosteoblastswereobtainedbyselectiveplatingtechniquethatcanremoveimpuritiessuchasfibroblastcells.[Keywords]Osteoblast;Primaryculture;Rat;Mixedenzymedigestion随着中国人口老龄化的到来，骨质疏松的发病率呈上升趋势，骨质疏松的发病机制和治疗的研究也越来越引起人们的重视。为了探讨各种

7、基因在成骨细胞中的表达以及外源性基因对成骨细胞的影响，建立一种简单，高效的成骨细胞培养方法成为目前各种科学研究的必要条件。目前原代培养的成骨样细胞方法很多，各种方法获得的细胞数量、活性多不一致。笔者的研究在于通过不断的摸索，获得一种既操作简单，又能获得细胞量较多且成活率较高的原代细胞培养方法，为下一步的实验奠定坚实的基础1材料与方法1.1主要仪器、试剂及实验动物出生24h内的SD大鼠6只（吴氏实验动物），DMEM培养基（HycloneX胎牛血清（Hyclone.25%胰酶（加EDTA）（HycloneI型胶原酶（SigmaL-谷氨酰胺（Ame